2. 器材:(1)恒温水浴锅 12 台(2)722 分光光度计 25 台 (四)实验十一、细胞色素 C 的制备试剂: 1.试剂: (1) 猪心:26 组×50g=1300g/班,两班共 2600g。每次(7-8 斤)5 斤(星期二、五上午)。 (2) (腐蚀性)(专用)10%NaOH(1000ml):100gNaOH+H2O 至 1000ml 溶液,分 13 瓶。 (3) (腐蚀性)(白色 125ml)20%TCA(500ml):100g 三氯醋酸+水至 500ml 溶液,分装 6 瓶。 (4) (腐蚀性)(白色 250ml)0.145mol/l TCA(3000ml):71.1g+H2O 至 3000ml 溶液。 (5) 硫酸铵:6 瓶。 2.器材: (1)药匙 48 把(2)称量纸 1 袋(3)托盘天平 12 架(4)捣碎机 12 台。 (五)实验十二、凝胶层析法测定蛋白分子量 1.试剂: (1)(层析用)0.01mol/l Tris-HCl 缓冲液,PH7.5,含 0.2mol/l NaCl(10000ml): 0.2mol/l Tris(1000ml),24.23g+H2O 至 1000ml 溶液; 1N HCl(200ml),17.7ml 浓 HCl+H2O 至 200ml 溶液; 117g NaCl+500ml 0.2mol/l Tris+40.3ml 1N HCl+H2O 至 10000ml 溶液。 2.药品: (1)分步收集仪 12 台(2)层析柱 12 支(3)核酸蛋白质检测仪 12 台(4)离心机 12 架(5)透析玻璃 纸 1 整张(6)记录仪 12 台。 (六)实验十五、凝胶等电聚焦法测定蛋白质等电点(盘状电泳槽) 1.试剂: (1) 凝胶贮备液(200ml):56g 丙烯酰胺+1.6g 亚甲基双丙烯酰胺+水至 200ml 溶液。(缺货) (2) 10%四甲基乙二胺(100ml):10ml 四甲基乙二胺+水至 100ml 溶液。 (3) 10%过硫酸铵(5ml):0.5g 过硫酸铵+水至 5ml 溶液(当天配制)。 (4) 两性电解质载体 pH 3-10 (上海试剂二厂)。(缺货) (5) 电极溶液: (A)、5%H3PO4(10000ml):588ml 85%H3PO4+H2O 至 10000ml 溶液。 (B)、2%NaOH(10000ml):200g NaOH+H2O 至 10000ml 溶液。 (6) 40%蔗糖(100ml):40g 蔗糖+水至 100ml 溶液。 (7) 考马斯亮兰 R250(500ml):0.25g R250+50ml Hac+450ml H2O 至 500ml 溶液。 (8) 脱色液 7%醋酸(1000ml):200ml HAc+H2O 至 1000ml 溶液。 (9) 10%TCA(1000ml):100g 三氯乙酸+H2O 至 1000ml 溶液。(可能不配) 2.器材: (1) 12 个电泳槽(2)12 台电泳仪(3)12 长针头(4)200ul 加样器 48 把(5)刀片 12 片 (6)PH 试纸(3—10)12 套(7)细铜丝 180 条。 (七)实验十六、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白分子量(垂直电泳槽) 实验十七、聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白分子量(垂直电泳槽)(PAGE,把 SDS 换水,无巯基 乙醇) 1.试剂:2. 器材:(1)恒温水浴锅 12 台(2)722 分光光度计 25 台 (四)实验十一、细胞色素 C 的制备试剂: 1.试剂: (1) 猪心:26 组×50g=1300g/班,两班共 2600g。每次(7-8 斤)5 斤(星期二、五上午)。 (2) (腐蚀性)(专用)10%NaOH(1000ml):100gNaOH+H2O 至 1000ml 溶液,分 13 瓶。 (3) (腐蚀性)(白色 125ml)20%TCA(500ml):100g 三氯醋酸+水至 500ml 溶液,分装 6 瓶。 (4) (腐蚀性)(白色 250ml)0.145mol/l TCA(3000ml):71.1g+H2O 至 3000ml 溶液。 (5) 硫酸铵:6 瓶。 2.器材: (1)药匙 48 把(2)称量纸 1 袋(3)托盘天平 12 架(4)捣碎机 12 台。 (五)实验十二、凝胶层析法测定蛋白分子量 1.试剂: (1)(层析用)0.01mol/l Tris-HCl 缓冲液,PH7.5,含 0.2mol/l NaCl(10000ml): 0.2mol/l Tris(1000ml),24.23g+H2O 至 1000ml 溶液; 1N HCl(200ml),17.7ml 浓 HCl+H2O 至 200ml 溶液; 117g NaCl+500ml 0.2mol/l Tris+40.3ml 1N HCl+H2O 至 10000ml 溶液。 2.药品: (1)分步收集仪 12 台(2)层析柱 12 支(3)核酸蛋白质检测仪 12 台(4)离心机 12 架(5)透析玻璃 纸 1 整张(6)记录仪 12 台。 (六)实验十五、凝胶等电聚焦法测定蛋白质等电点(盘状电泳槽) 1.试剂: (1) 凝胶贮备液(200ml):56g 丙烯酰胺+1.6g 亚甲基双丙烯酰胺+水至 200ml 溶液。(缺货) (2) 10%四甲基乙二胺(100ml):10ml 四甲基乙二胺+水至 100ml 溶液。 (3) 10%过硫酸铵(5ml):0.5g 过硫酸铵+水至 5ml 溶液(当天配制)。 (4) 两性电解质载体 pH 3-10 (上海试剂二厂)。(缺货) (5) 电极溶液: (A)、5%H3PO4(10000ml):588ml 85%H3PO4+H2O 至 10000ml 溶液。 (B)、2%NaOH(10000ml):200g NaOH+H2O 至 10000ml 溶液。 (6) 40%蔗糖(100ml):40g 蔗糖+水至 100ml 溶液。 (7) 考马斯亮兰 R250(500ml):0.25g R250+50ml Hac+450ml H2O 至 500ml 溶液。 (8) 脱色液 7%醋酸(1000ml):200ml HAc+H2O 至 1000ml 溶液。 (9) 10%TCA(1000ml):100g 三氯乙酸+H2O 至 1000ml 溶液。(可能不配) 2.器材: (1) 12 个电泳槽(2)12 台电泳仪(3)12 长针头(4)200ul 加样器 48 把(5)刀片 12 片 (6)PH 试纸(3—10)12 套(7)细铜丝 180 条。 (七)实验十六、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白分子量(垂直电泳槽) 实验十七、聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白分子量(垂直电泳槽)(PAGE,把 SDS 换水,无巯基 乙醇) 1.试剂: