(1)切片的处理:细胞涂(爬)片用含丙酮的福尔马林固定液固定30s 冰冻切片可用丙酮固定10min左右,0.0 IM PBS洗涤3次,每次5min;石蜡切 片需先经脱蜡,然后用系列酒精脱水。 (2)加入一抗,室温孵育15min或4℃孵育24hs (3)用PBS洗涤3次,每次5min。 (4)加生物素标记的第二抗体,室温孵育2h (5)用PBS洗涤3次,每次5min。 (6)加ABC复合物室温作用30min (7)用PBS洗涤3次,每次5min (8)用DAB-H2O2液显色,镜下控制显色程度。 (9)苏木素复染。 (10)系列酒精脱水,二甲苯透明,DPX封固,镜检。 第三节免疫沉淀与免疫共沉淀 、基本概念 免疫沉淀( Immunoprecipitation)是利用抗体可与抗原特异性结合的特性, 将抗原(常为靶蛋白)从混合体系沉淀下来,初步分离靶蛋白的一种方法。 免疫共沉淀( coimmunoprecipitation)是一种在体外探测两个蛋白分子间是 否存在特异性相互作用的一种方法。其原理是如果两个蛋白在体外体系能够发生 特异性相互作用的话,那么当用一种蛋白的抗体进行免疫沉淀时,另一个蛋白也 会被同时沉淀下来。与酵母双杂交技术不同,免疫共沉淀技术所利用的是抗原和 抗体间的免疫反应,是一种基于体外非细胞的环境中研究蛋白质与蛋白质的相互 作用的方法。 不难看出,免疫共沉淀与免疫沉淀技术所使用的原理与方法大致相似,所不 同的是,在免疫共沉淀中,对靶蛋白的结合与沉淀由另一个与之发生相互作用的 蛋白替代。在免疫共沉淀或免疫沉淀的基础上,通过进一步与其它技术的结合, 如聚丙烯酰胺凝胶电泳,还可进一步对靶蛋白的的分子量等特性进行鉴定 、抗体的选择（1）切片的处理：细胞涂（爬）片用含丙酮的福尔马林固定液固定 30s； 冰冻切片可用丙酮固定 10min 左右，0.01M PBS 洗涤 3 次，每次 5min；石蜡切 片需先经脱蜡，然后用系列酒精脱水。 （2）加入一抗，室温孵育 15min 或 4℃孵育 24h。 （3）用 PBS 洗涤 3 次，每次 5min。 （4）加生物素标记的第二抗体，室温孵育 2h。 （5）用 PBS 洗涤 3 次，每次 5min。 （6）加 ABC 复合物室温作用 30min。 （7）用 PBS 洗涤 3 次，每次 5min。 （8）用 DAB-H2O2 液显色，镜下控制显色程度。 （9）苏木素复染。 （10）系列酒精脱水，二甲苯透明，DPX 封固，镜检。 第三节 免疫沉淀与免疫共沉淀 一、基本概念 免疫沉淀（immunoprecipitation）是利用抗体可与抗原特异性结合的特性， 将抗原（常为靶蛋白）从混合体系沉淀下来，初步分离靶蛋白的一种方法。 免疫共沉淀（coimmunoprecipitation）是一种在体外探测两个蛋白分子间是 否存在特异性相互作用的一种方法。其原理是如果两个蛋白在体外体系能够发生 特异性相互作用的话，那么当用一种蛋白的抗体进行免疫沉淀时，另一个蛋白也 会被同时沉淀下来。与酵母双杂交技术不同，免疫共沉淀技术所利用的是抗原和 抗体间的免疫反应，是一种基于体外非细胞的环境中研究蛋白质与蛋白质的相互 作用的方法。 不难看出，免疫共沉淀与免疫沉淀技术所使用的原理与方法大致相似，所不 同的是，在免疫共沉淀中，对靶蛋白的结合与沉淀由另一个与之发生相互作用的 蛋白替代。在免疫共沉淀或免疫沉淀的基础上，通过进一步与其它技术的结合， 如聚丙烯酰胺凝胶电泳，还可进一步对靶蛋白的的分子量等特性进行鉴定。 二、抗体的选择