(一)抗生物素生物素免疫细胞化学染色的原理 人们对抗生物素-生物素亲和作用的发现源于养殖实践。研究发现,来自饲 料中的鸡蛋白成分中的抗生物素(又称卵白素, av idin)能和生物素(又称维生 素H)结合,从而导致“维生素H缺乏症”的发生。进一步硏究发现,抗生物素 与生物素的这种亲和力远比抗原与抗体间的亲和力要高出100万倍,且不会影响 彼此的生物活性。免疫细胞化学工作者受这一特殊现象的启发,便建立起来了抗 生物素生物素免疫细胞化学染色方法。 (二)抗生物素生物素免疫细胞化学染色方法 常见的抗生物素生物素免疫细胞化学染色方法主要有抗生物素生物素过 氧化酶复合物技术( avid in biotin- perox idase complex technique,ABC法)、桥抗 生物素生物素技术( bridged avid in- biotin technique,BRAB法)、标记生物素-抗 生物素技术( labelled avid in- biotin technique,LAB法)三种,其中以抗生物素 生物素过氧化酶复合物技术最为常用 1.抗生物素生物素-过氧化酶复合物技术(ABC)的原理利用抗生物素 分别将生物素标记的二抗和生物素标记的酶连接起来。与LAB法和BRAB法不 同之处在于:①一抗不被标记物所标记;②生物素标记的二抗与ABC复合物相 连接。ABC复合物是通过先将过氧化酶结合在生物素上、再将生物素-过氧化酶 连接物与过量的抗生物素蛋白反应而制备的 ABC法具有特异性强、敏感度高、背景染色浅等优点。 所需试剂 特异性抗体(单克隆或多克隆);生物素标记的二抗;ABC复合物〔经验表 明,当生物素与抗生物素的摩尔浓度之比为1:4时,能获得最佳满意效果,宜 在应用前30min用005M的 Tris-HCI液(pH76)进行配制);丙酮:001MPBS (pH72-76); DAB-H2O液〔含005%DAB、0.05M的TB液(0.5 M Tris-HCl 液+8.5 g NaCl,加水定容到100mn,pH76)、0.01%H2O2);0.05 M Tris-HCI液 (pH76);抗体稀释液(含0.1%BSA、0.02%KHPO4、0.29%aHPO412HxO、 08%NaCl、002%KC1、0.05%Tvee-20溶液50μ1);DPX( Distren10g+5ml酸 二丁+35ml二甲苯)。 3.操作步骤（一）抗生物素-生物素免疫细胞化学染色的原理 人们对抗生物素-生物素亲和作用的发现源于养殖实践。研究发现，来自饲 料中的鸡蛋白成分中的抗生物素（又称卵白素，avidin）能和生物素（又称维生 素 H）结合，从而导致“维生素 H 缺乏症”的发生。进一步研究发现，抗生物素 与生物素的这种亲和力远比抗原与抗体间的亲和力要高出 100 万倍，且不会影响 彼此的生物活性。免疫细胞化学工作者受这一特殊现象的启发，便建立起来了抗 生物素-生物素免疫细胞化学染色方法。 （二）抗生物素-生物素免疫细胞化学染色方法 常见的抗生物素-生物素免疫细胞化学染色方法主要有抗生物素-生物素-过 氧化酶复合物技术（avidin biotin-peroxidase complex technique，ABC 法）、桥抗 生物素-生物素技术（bridged avidin-biotin technique，BRAB 法）、标记生物素-抗 生物素技术（labelled avidin-biotin technique，LAB 法）三种，其中以抗生物素- 生物素-过氧化酶复合物技术最为常用。 1．抗生物素-生物素-过氧化酶复合物技术（ABC）的原理 利用抗生物素 分别将生物素标记的二抗和生物素标记的酶连接起来。与 LAB 法和 BRAB 法不 同之处在于：①一抗不被标记物所标记；②生物素标记的二抗与 ABC 复合物相 连接。ABC 复合物是通过先将过氧化酶结合在生物素上、再将生物素-过氧化酶 连接物与过量的抗生物素蛋白反应而制备的。 ABC 法具有特异性强、敏感度高、背景染色浅等优点。 2．所需试剂 特异性抗体（单克隆或多克隆）；生物素标记的二抗；ABC 复合物〔经验表 明，当生物素与抗生物素的摩尔浓度之比为 1：4 时，能获得最佳满意效果，宜 在应用前 30min 用 0.05M 的 Tris-HCl 液（pH7.6）进行配制〕；丙酮；0.01M PBS （pH 7.2-7.6）；DAB-H2O2 液〔含 0.05％DAB、0.05M 的 TB 液（0.5M Tris-HCl 液+8.5g NaCl, 加水定容到 1000ml， pH7.6）、0.01% H2O2〕；0.05M Tris-HCl 液 （pH7.6）；抗体稀释液（含 0.1%BSA、0.02%KH2PO4、0.29%Na2HPO4·12H2O、 0.8%NaCl、0.02%KCl、0.05%Tween-20 溶液 50μl）；DPX（Distren 10g+5ml 酸 二丁+35ml 二甲苯）。 3．操作步骤