接种环必须经火焰彻底灭菌：操作完毕后，防止再让培养基接触外界空气，接种环通过酒精 灯火焰灭菌。 3.防止过热的接种环杀死需要分离培养的细菌。接种环在烧灼灭菌后，不能立即钓取细 菌材料，否则会将细菌烫死：另外，还应注意防止己钓取菌料的接种环，不慎通过火焰而将 细菌杀死。 4.纯化分离菌。初代分离时若长出两种以上菌落，应进一步挑选可疑菌落进行纯培养。 细菌的分离培养法 (一)需氧菌分离培养法 1.平板划线法此法为最常用的细菌分离培养方法，其原则在于使被检材料充分分散， 以便经过培养后得到单个菌落，并可对菌落的形态、颜色、溶血与否等进行观察。 术式：右手似持毛笔的姿势持接种棒的塑料柄处，将接种环伸入酒精灯火焰中烧至通红， 再缓慢将接种棒其余金属部分均加以烧灼，准备蘸取材料：左手取琼脂平板，琼脂面与水平 面成45°角，接种环同培养基平面也成45°角。靠近酒精灯火焰操作。 方法：接种环经烧灼灭菌、冷却后，蘸取欲分离材料少许，按图实5-2中所示的几种划 线方式，选择其中一种进行划线。注意不要划破琼脂，不要划得太疏，不要过多重复划线， 以免形成菌苔。划毕，将培养基用皿盖盖好，接种环烧灼灭菌，于皿底用蜡笔标记被分离材 料名称及日期，倒转置37℃恒温箱中培养。 2.倾注法取3支预先准备的普通琼脂培养基管，水浴加热融化，冷至约50℃，用火 焰灭菌接种环钓取待分离物接种至第1管内，充分摇匀后，自第1管取一接种环内容物至第 2管，以同样方法自第2管移种至第3管。然后分别倾注一个已灭菌的平皿，凝固后倒转置 温箱内培养。结果多数细菌在琼脂内生长成菌落。仅少数菌落出现在表面，通常第一个平板 内的菌落数较多而密集，第二、三个平板则逐渐减少，可见单个菌落。此法目前已较少应用 (二)厌氧菌分离培养法厌氧菌生长繁殖的环境不能有游离氧的存在，故在培养厌氧菌时， 必须创造一个厌氧环境，一般以降低氧的张力或保持减低的氧张力为原则。目前，应用于厌 氧菌的分离培养方法颇多，现就其中较简便的几种方法介绍如下： 9 接种环必须经火焰彻底灭菌；操作完毕后，防止再让培养基接触外界空气，接种环通过酒精 灯火焰灭菌。 3．防止过热的接种环杀死需要分离培养的细菌。接种环在烧灼灭菌后，不能立即钓取细 菌材料，否则会将细菌烫死；另外，还应注意防止已钓取菌料的接种环，不慎通过火焰而将 细菌杀死。 4．纯化分离菌。初代分离时若长出两种以上菌落，应进一步挑选可疑菌落进行纯培养。 细菌的分离培养法 （一）需氧菌分离培养法 1．平板划线法 此法为最常用的细菌分离培养方法，其原则在于使被检材料充分分散， 以便经过培养后得到单个菌落，并可对菌落的形态、颜色、溶血与否等进行观察。 术式：右手似持毛笔的姿势持接种棒的塑料柄处，将接种环伸入酒精灯火焰中烧至通红， 再缓慢将接种棒其余金属部分均加以烧灼，准备蘸取材料；左手取琼脂平板，琼脂面与水平 面成 45°角，接种环同培养基平面也成 45°角。靠近酒精灯火焰操作。 方法：接种环经烧灼灭菌、冷却后，蘸取欲分离材料少许，按图实 5-2 中所示的几种划 线方式，选择其中一种进行划线。注意不要划破琼脂，不要划得太疏，不要过多重复划线， 以免形成菌苔。划毕，将培养基用皿盖盖好，接种环烧灼灭菌，于皿底用蜡笔标记被分离材 料名称及日期，倒转置 37℃恒温箱中培养。 2．倾注法 取 3 支预先准备的普通琼脂培养基管，水浴加热融化，冷至约 50℃，用火 焰灭菌接种环钓取待分离物接种至第 1 管内，充分摇匀后，自第 1 管取一接种环内容物至第 2 管，以同样方法自第 2 管移种至第 3 管。然后分别倾注一个已灭菌的平皿，凝固后倒转置 温箱内培养。结果多数细菌在琼脂内生长成菌落．仅少数菌落出现在表面，通常第一个平板 内的菌落数较多而密集，第二、三个平板则逐渐减少，可见单个菌落。此法目前已较少应用。 （二）厌氧菌分离培养法 厌氧菌生长繁殖的环境不能有游离氧的存在，故在培养厌氧菌时， 必须创造一个厌氧环境，一般以降低氧的张力或保持减低的氧张力为原则。目前，应用于厌 氧菌的分离培养方法颇多，现就其中较简便的几种方法介绍如下：