③可能杀死抹片中的微生物。 必须注意：在抹片固定过程中，实际上并不保证能杀死全部细菌，也不能完全避免在染 色水洗时会将部分材料冲脱，因此，在制备烈性病原菌，特别是带芽孢的病原菌的染色抹片 时，应严格慎重处理染色用过的残液和抹片本身，以免引起病原的散播。固定好的抹片，即 可进行各种方法的染色。 白、染色革兰(Gram)氏染色法 (1)在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经1-2mn,水洗。这时细菌 都染成紫色。 (2)加革兰氏碘溶液于抹片上助染，作用1-3m,水洗。这时细菌都呈更深的紫色。 (3)加95%酒精于抹片上脱色，约30s至1min,水洗。这时有的细菌紫色被脱去，呈无色： 有的紫色脱不了，仍保持紫色。 (4)加碱性复红液复染10-30s,水洗。这时己脱色的细菌复染成红色，未脱色的细菌呈蓝 紫色。 (⑤)吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色 四、作业 试述革兰氏染色的关键步骤。 实验三细菌的分离培养及培养性状观察 一、实验目的要求 1.掌握需氧菌分离培养的基本要领。 2.了解厌氧菌的分离培养原则及常用的几种分离培养法。 3.了解细菌在固体和液体培养基中的生长表现。 二、实验用品 隔水式恒温培养箱、电冰箱、高压蒸汽灭菌器、天平、接种环、酒精灯、试管、营养琼 脂、平皿、精密pH试纸、试管架、火柴。 三、实验方法及步骤 细菌分离培养和移植的一般原则 分离培养是细菌学检验的基本技术之一。分离培养的目的在于从被检材料中，或者从污 染的众多杂菌中分离出纯的病原菌。细菌分离培养的步骤：先从被检材料或病料中分离培养 单个菌落，然后钓取可疑菌落进行纯培养，再将纯培养物移植培养。进行细菌分离培养和移 植应注意下列事项： 1.选择适当培养基和培养条件。分离培养前应充分考虑所分离的细菌的特性，选择适合 其生长的培养基以及所需的气体与培养温度（病原南菌一般为37℃）等。 2.严格无菌操作、防止污染。培养基和一切用具必须彻底灭菌：操作时必须靠近火焰8 ③可能杀死抹片中的微生物。 必须注意：在抹片固定过程中，实际上并不保证能杀死全部细菌，也不能完全避免在染 色水洗时会将部分材料冲脱，因此，在制备烈性病原菌，特别是带芽孢的病原菌的染色抹片 时，应严格慎重处理染色用过的残液和抹片本身，以免引起病原的散播。固定好的抹片，即 可进行各种方法的染色。 ㈡、染色 革兰（Gram）氏染色法 ⑴在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，经 1-2min，水洗。这时细菌 都染成紫色。 ⑵加革兰氏碘溶液于抹片上助染，作用 1-3 min，水洗。这时细菌都呈更深的紫色。 ⑶加 95%酒精于抹片上脱色，约 30s 至 1 min,水洗。这时有的细菌紫色被脱去，呈无色； 有的紫色脱不了，仍保持紫色。 ⑷加碱性复红液复染 10-30 s，水洗。这时已脱色的细菌复染成红色，未脱色的细菌呈蓝 紫色。 ⑸吸干或烘干，镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 四、作 业 试述革兰氏染色的关键步骤。 实验三 细菌的分离培养及培养性状观察 一、实验目的要求 1．掌握需氧菌分离培养的基本要领。 2．了解厌氧菌的分离培养原则及常用的几种分离培养法。 3．了解细菌在固体和液体培养基中的生长表现。 二、实验用品 隔水式恒温培养箱、电冰箱、高压蒸汽灭菌器、天平、接种环、酒精灯、试管、营养琼 脂、平皿、精密 pH 试纸、试管架、火柴。 三、实验方法及步骤 细菌分离培养和移植的一般原则 分离培养是细菌学检验的基本技术之一。分离培养的目的在于从被检材料中，或者从污 染的众多杂菌中分离出纯的病原菌。细菌分离培养的步骤：先从被检材料或病料中分离培养 单个菌落，然后钓取可疑菌落进行纯培养，再将纯培养物移植培养。进行细菌分离培养和移 植应注意下列事项： 1．选择适当培养基和培养条件。分离培养前应充分考虑所分离的细菌的特性，选择适合 其生长的培养基以及所需的气体与培养温度（病原菌一般为 37℃）等。 2．严格无菌操作、防止污染。培养基和一切用具必须彻底灭菌；操作时必须靠近火焰