“甲醇+水(60+40)”定容至100mL,配制成50HgmL的染料木素和32μg/mL的大豆苷元标准溶液 4.测定步骤 (1)样品处理 a.固体样品:准确称取一定量固体粉末样品于100mL容量瓶中,定量加入80%乙醇,经超声振荡5min, 加水补足至刻度,待提取液略澄清后经离心分离(3000r/min,5min),取上清液经045μm滤膜过滤后待 进样 b.液体样品:准确吸取2·0mL液体样品,加入80%乙醇摇匀并定容100mL,澄清后同上述步骤 (2)色谱分离条件 色谱柱:Shim- Pack clc-ODS,6mmx150mm,5m。 流动相:甲醇+水(60+40),临用前用超声波除气 流速:0~5min,为10mL/min:5~10min为16 mL/min。 柱温:40℃。 检测波长:UV260nm 灵敏度:0.016AUFS 进样量:104L (3)样品测定:准确称取样品处理液和标准液各10μL(或相同体积)注入高效液相色谱仪进行分 离,以其标准溶液峰的保留时间进行定性,利用峰面积求出样液中待测物质的含量。 5.结果计算 S. xm 式中X一样品中染料木素大豆苷元的含量(ug/g); S1-一样品峰面积 c——标准溶液浓度(μg/mL); S2-一标准溶液峰面积 —一样品定容体积(mL) m试样质量(g)。 样品中大豆异黄酮含量X(gg)=X+XXg、X分别为样品中染料木素及大豆苷元的含量) 6.注释 (1)本法染料木素浓度在001~0.1mg/mL范围内呈直线关系,相关系数为0.9968大豆苷元浓度在 0.003~0.03mg/mL范围内呈直线关系,相关系数09945 (2)精密度:同一样品依本法重复6次,染料木素、大豆苷元的相对标准差(RSD)分别为3.1%及 (3)回收率:依本法各取试样9份,每3份为一组,分别加入不同量标准品进行试样处理,染料木 素添加回收率为950%~1037%、大豆苷元添加回收率为958%~1055%8 “甲醇+水（60+40）”定容至 100mL，配制成 50μg/mL 的染料木素和 32μg/mL 的大豆苷元标准溶液。 4. 测定步骤 （1）样品处理： a. 固体样品：准确称取一定量固体粉末样品于100mL容量瓶中，定量加入80%乙醇，经超声振荡5min， 加水补足至刻度，待提取液略澄清后经离心分离（3000r/min，5min），取上清液经 0.45μm 滤膜过滤后待 进样。 b. 液体样品：准确吸取 2.0mL 液体样品，加入 80%乙醇摇匀并定容 100mL，澄清后同上述步骤。 （2）色谱分离条件： 色 谱 柱：Shim—Pack CLC—ODS，6mm×l50mm，5μm。 流 动 相：甲醇+水（60+40），临用前用超声波除气。 流 速：0～5min，为 1.0mL/min；5～10min 为 1.6mL/min。 柱 温：40℃。 检测波长：UV260nm。 灵 敏 度：0.016AUFS。 进 样 量：l0μL。 （3）样品测定：准确称取样品处理液和标准液各 l0μL（或相同体积）注入高效液相色谱仪进行分 离，以其标准溶液峰的保留时间进行定性，利用峰面积求出样液中待测物质的含量。 5. 结果计算 S m S c V X    = 2 1 式中 X——样品中染料木素/大豆苷元的含量（μg/g）； S1——样品峰面积； c ——标准溶液浓度（μg/mL）； S2——标准溶液峰面积； V——样品定容体积（mL）； m——试样质量（g）。 样品中大豆异黄酮含量 X（μg/g）=Xg+Xd(Xg、Xd 分别为样品中染料木素及大豆苷元的含量) 6. 注释 （1）本法染料木素浓度在 0.01～0.1mg/mL 范围内呈直线关系，相关系数为 0.9996；大豆苷元浓度在 0.003～0.03mg/mL 范围内呈直线关系，相关系数 0.9945。 （2）精密度：同一样品依本法重复 6 次，染料木素、大豆苷元的相对标准差（RSD）分别为 3.1%及 1.2%。 （3）回收率：依本法各取试样 9 份，每 3 份为一组，分别加入不同量标准品进行试样处理，染料木 素添加回收率为 95.0%～103.7%、大豆苷元添加回收率为 95.8%～105.5%