能与产物之一反应的物质,从反应混合物中除去产物之一,而使反应进行得更为彻底。 在最适反应条件下达到反应平衡所需的时间与酶量有关,酶量多则达到反应平衡所需的时间 短。应采用在适当时间内达到平衡所需的酶量 1122.2动力学法 60年代初以来,出现了各种连续动力学分析仪,这些仪器一般是通过若干固定的时间间隔 对反应的进程进行跟踪,检验曲线的线性部分,并打印出反应的初速度,根据反应的初速度计算 出底物浓度。此方法的灵敏度随着底物浓度的增加而明显降低,因此S0=Km是动力学法应用的 上限 11.2.3酶活性测定原理 当底物浓度远大于酶浓度时,测定反应的初速度,可得到酶浓度 11.24干试纸条 将测定底物所需的酶和其它物质按一定次序铺在试纸(或塑料片)上,滴上待测溶液或将试纸 条浸入待测溶液中,就会产生颜色变化,将产生的颜色与标准色版比较,可得到测定结果 如图是尿素干试纸条的结构。当一滴血清滴到尿素干试纸条上时,样品首先同多孔的扩散层 接触,通过毛细作用快速均匀地扩散开来。扩散层下面是试剂层,此层含有结合在明胶上的脲酶 和缓冲剂。脲酶催化尿素水解成氨和CO2,然后氨通过半透膜扩散到 扩层(奸维◆二化〕 指示剂层,在此产生颜色。干试纸条还可用于测定葡萄糖、尿酸、胆固明试《冲 醇、甘油三酯等 指示剂层(酸纤维震+无色染料 透明光持物 112.5酶电极 酶电极又叫生物分析探针,它是由一种电化学传感器和一层固定化酶层及一到两层滤膜组 成,用来测定某些物质的含量。待测物通过滤膜扩散到固定化酶层,经酶催化转变成产物,产物 再扩散到电化学传感器表面发生电化学反应,产生电信号,此电信号经放大后用电流表或电压表 指示出来,或用记录仪记录下来。若用电流表示,被测物质的浓度与电流成线性关系:若用电压 表示,则被测物质的浓度与电压成对数关系。 不时称 化学传感器又称为电极,不同的电极对不同的物质敏感。根 多孔 据敏感物质的不同,电极分为氧电极、H2O2电极、氨电极、CO2电 极、pH电极等。对底物专一性强并能产生这些敏感物质的酶与相应 H2电 的电极组合,就可用来测定相应的底物。实用的酶电极要求专一性 强,灵敏度高,抗干扰能力强。成熟的酶电极是测葡萄糖的酶电极,其结构见右图。 图中的外膜由聚碳酸酯制作。它允许葡萄糖、氧气及其它小分子物质透过,不允许细胞和大 分子物质透过。固定的葡萄糖氧化酶催化的反应为:能与产物之一反应的物质，从反应混合物中除去产物之一，而使反应进行得更为彻底。 在最适反应条件下达到反应平衡所需的时间与酶量有关，酶量多则达到反应平衡所需的时间 短。应采用在适当时间内达到平衡所需的酶量。 11.2.2.2 动力学法 60 年代初以来，出现了各种连续动力学分析仪，这些仪器一般是通过若干固定的时间间隔 对反应的进程进行跟踪，检验曲线的线性部分，并打印出反应的初速度，根据反应的初速度计算 出底物浓度。此方法的灵敏度随着底物浓度的增加而明显降低，因此 S0＝Km是动力学法应用的 上限。 11.2.3 酶活性测定原理 当底物浓度远大于酶浓度时，测定反应的初速度，可得到酶浓度。 11.2.4 干试纸条 将测定底物所需的酶和其它物质按一定次序铺在试纸(或塑料片)上，滴上待测溶液或将试纸 条浸入待测溶液中，就会产生颜色变化，将产生的颜色与标准色版比较，可得到测定结果。 如图是尿素干试纸条的结构。当一滴血清滴到尿素干试纸条上时，样品首先同多孔的扩散层 接触，通过毛细作用快速均匀地扩散开来。扩散层下面是试剂层，此层含有结合在明胶上的脲酶 和缓冲剂。 脲酶催化尿素水解成氨和 CO2，然后氨通过半透膜扩散到 指示剂层，在此产生颜色。干试纸条还可用于测定葡萄糖、尿酸、胆固 醇、甘油三酯等。 11.2.5 酶电极 酶电极又叫生物分析探针，它是由一种电化学传感器和一层固定化酶层及一到两层滤膜组 成，用来测定某些物质的含量。待测物通过滤膜扩散到固定化酶层，经酶催化转变成产物，产物 再扩散到电化学传感器表面发生电化学反应，产生电信号，此电信号经放大后用电流表或电压表 指示出来，或用记录仪记录下来。若用电流表示，被测物质的浓度与电流成线性关系；若用电压 表示，则被测物质的浓度与电压成对数关系。 电化学传感器又称为电极，不同的电极对不同的物质敏感。根 据敏感物质的不同，电极分为氧电极、H2O2 电极、氨电极、CO2 电 极、pH 电极等。对底物专一性强并能产生这些敏感物质的酶与相应 的电极组合，就可用来测定相应的底物。实用的酶电极要求专一性 强，灵敏度高，抗干扰能力强。成熟的酶电极是测葡萄糖的酶电极，其结构见右图。 图中的外膜由聚碳酸酯制作。它允许葡萄糖、氧气及其它小分子物质透过，不允许细胞和大 分子物质透过。固定的葡萄糖氧化酶催化的反应为：