葡萄糖十O2氧葡萄糖酸+H2O2 反应产物H2O2扩散透过醋酸纤维制成的内膜,在铂电极(阳极)处发生下列反应 H2O O2+2H+2e 醋酸纤维内膜的孔更小,其截留分子量为100。该膜可以阻止葡萄糖、尿酸、抗坏血酸、以 及大部分其它可能产生干扰的物质到达电极 酶电极用于临床检验有许多优点:检测快速、灵敏度高、取样量少、费用低、携带方便。使 用时主要应注意干扰物质的影响 1.26酶法免疫测定(EIA 利用抗原抗体反应的专一性,可以进行一些物质的测定,被测定的物质既可以是抗原,也可 是抗体。酶法免疫测定可分为均相反应和非均相反应两类。 1126.1均相反应 均相反应在检测时不需要分离抗原、抗体或抗原抗体复合物,方法简便、快捷。此方法的基 本原理是用一定量的酶标抗原和未知量的游离抗原(待测抗原)竞争性地与有限量的抗体反应,然 后又分为两种情况:一是酶标抗原上的酶有活性,与抗体形成酶一抗原一抗体复合物后酶失去活 性。这样,当待测抗原多时,抗原抗体复合物中的酶标抗原就少,游离的酶标抗原多,体系中的 酶活性高:待测抗原少时,抗原抗体复合物中的酶标抗原就多,游离的酶标抗原少,体系中的酶 活性低。通过加入显色底物后比色,可测出酶活性的大小,从而得知待测抗原的多少。在这种情 况下,酶活性与待测抗原的量成正相关。二是酶标抗原上的酶失去活性,与抗体形成酶一抗原 抗体复合物后酶恢复活性。这样,当待测抗原多时,抗原抗体复合物中的酶标抗原就少,恢复的 酶活性也少,体系中的酶活性低;待测抗原少时,抗原抗体复合物中的酶标抗原就多,恢复的酶 活性也多,体系中的酶活性高。这种情况下是酶活性与待测抗原的量成反相关。第二种情况的例 子如甲状腺素一苹果酸脱氢酶结合物中的酶没有活性,与甲状腺素的抗体结合后酶恢复活性。 还有两种情况是不用酶标抗原,一种是用底物标记抗原,与待测抗原及抗体反应后,加入游 离酶,游离的底物标记抗原具有底物活性,可被酶催化形成产物,而与抗体形成底物一抗原一抗 体复合物的不具有底物活性。产物的量与待测抗原的量成正相关。这种方法因没有放大作用,灵 敏度较差,但若能产生荧光产物可补偿这个缺点。如伞形酮一艮他霉素可被β一半乳糖苷酶水解 产生荧光产物。二是用酶抑制剂标记抗原,如甲状腺素在同磷酸盐共价结合后,就可成为胆碱酯 酶的不可逆抑制剂,但磷酸化的甲状腺素在与甲状腺素的抗体结合后,就不能抑制胆碱酯酶。当 体系中含有一定量的游离酶时,剩余的酶活性与待测抗原成反相关。 因为待测抗原往往是混合物(如血清),若其中含有酶抑制剂,会影响测定结果。 112.62非均相反应葡萄糖 ＋ O2 葡萄糖氧化酶 —————→ 葡萄糖酸 ＋ H2O2 反应产物 H2O2 扩散透过醋酸纤维制成的内膜，在铂电极(阳极)处发生下列反应： H2O2 —→ O2 ＋ 2H＋＋ 2e 醋酸纤维内膜的孔更小，其截留分子量为 100。该膜可以阻止葡萄糖、尿酸、抗坏血酸、以 及大部分其它可能产生干扰的物质到达电极。 酶电极用于临床检验有许多优点：检测快速、灵敏度高、取样量少、费用低、携带方便。使 用时主要应注意干扰物质的影响。 11.2.6 酶法免疫测定(EIA) 利用抗原抗体反应的专一性，可以进行一些物质的测定，被测定的物质既可以是抗原，也可 以是抗体。酶法免疫测定可分为均相反应和非均相反应两类。 11.2.6.1 均相反应 均相反应在检测时不需要分离抗原、抗体或抗原抗体复合物，方法简便、快捷。此方法的基 本原理是用一定量的酶标抗原和未知量的游离抗原(待测抗原)竞争性地与有限量的抗体反应，然 后又分为两种情况：一是酶标抗原上的酶有活性，与抗体形成酶—抗原—抗体复合物后酶失去活 性。这样，当待测抗原多时，抗原抗体复合物中的酶标抗原就少，游离的酶标抗原多，体系中的 酶活性高；待测抗原少时，抗原抗体复合物中的酶标抗原就多，游离的酶标抗原少，体系中的酶 活性低。通过加入显色底物后比色，可测出酶活性的大小，从而得知待测抗原的多少。在这种情 况下，酶活性与待测抗原的量成正相关。二是酶标抗原上的酶失去活性，与抗体形成酶—抗原— 抗体复合物后酶恢复活性。这样，当待测抗原多时，抗原抗体复合物中的酶标抗原就少，恢复的 酶活性也少，体系中的酶活性低；待测抗原少时，抗原抗体复合物中的酶标抗原就多，恢复的酶 活性也多，体系中的酶活性高。这种情况下是酶活性与待测抗原的量成反相关。第二种情况的例 子如甲状腺素—苹果酸脱氢酶结合物中的酶没有活性，与甲状腺素的抗体结合后酶恢复活性。 还有两种情况是不用酶标抗原，一种是用底物标记抗原，与待测抗原及抗体反应后，加入游 离酶，游离的底物标记抗原具有底物活性，可被酶催化形成产物，而与抗体形成底物—抗原—抗 体复合物的不具有底物活性。产物的量与待测抗原的量成正相关。这种方法因没有放大作用，灵 敏度较差，但若能产生荧光产物可补偿这个缺点。如伞形酮—艮他霉素可被β－半乳糖苷酶水解 产生荧光产物。二是用酶抑制剂标记抗原，如甲状腺素在同磷酸盐共价结合后，就可成为胆碱酯 酶的不可逆抑制剂，但磷酸化的甲状腺素在与甲状腺素的抗体结合后，就不能抑制胆碱酯酶。当 体系中含有一定量的游离酶时，剩余的酶活性与待测抗原成反相关。 因为待测抗原往往是混合物(如血清)，若其中含有酶抑制剂，会影响测定结果。 11.2.6.2 非均相反应