OH HO Mannose residue UDP-GKNAc Phospho- transferase diesterase \9HH9 OR Mannose 6-phosphate residue 图11.24甘露糖6磷酸标记物的形成。定位于溶酶体的糖蛋白在高尔基复合体经过两步加工产生 相应的定位信号。首先磷酸转移酶将磷酸N-乙酰葡糖胺转移到甘露糖6-OH,第二步是磷酸二酯 酶将第一步加入的糖基切下，使核心寡糖变成甘露糖6磷酸。 能够测定赛糖的序列 如何测定糖蛋白的寡糖结构以及蛋白质与寡糖连接的位，点吗？多数测定方法采用酶切，这些 酶能够断裂特定类型的糖苷键。 第一步将寡糖与蛋白质分开。例如N-连接的寡糖可以用N-糖苷酶F处理，释放寡糖。N-糖 苷酶F能够断裂寡糖与蛋白质之间的N-糖苷键。然后分离寡糖并进行分析。MALDI-TOF或其它 质谱技术能够确定寡糖的分子量。但是寡糖结构不同，但寡糖的质量却可能相同。用特异性不同 的糖苷酶处理，可以获得更多信息。例如，阝-1,4-糖苷酶仅水解半乳糖基的β-糖苷键（图11.25)。 酶切产物可以用质谱测定分子量。用不同的糖苷酶重复上述操作可以确定寡糖的结构。 蛋白酶用于确定蛋白质的糖基化位，点。糖苷酶处理前后的蛋白质用特异蛋白酶裂解，然后层 析方法分析蛋白酶裂解肽段，就能找出糖基化肽段。因为同一多肽糖基化后的层析行为与未糖基 化肽段明显不同。质谱分析或直接测定糖基化肽段的氨基酸序列能够确定蛋白质糖基化位点所在 的氨基酸序列。进一步分析可以确定糖基化的具体位点。 糖基化显著增加了蛋白组的复杂性。一个蛋白质有几个潜在的糖基化位点可以有多种糖基化 形式（通常用glycoform表示）。各种细胞，或同一细胞在不同的发育阶段，同一蛋白的糖基化形 式可能不同。我们已经测定了人类全基因组的核苷酸序列，现在已经开始认真研究更为复杂的蛋 白组，包括特异修饰蛋白的生物学功能。图 11.24 甘露糖 6-磷酸标记物的形成。定位于溶酶体的糖蛋白在高尔基复合体经过两步加工产生 相应的定位信号。首先磷酸转移酶将磷酸 N-乙酰葡糖胺转移到甘露糖 6-OH，第二步是磷酸二酯 酶将第一步加入的糖基切下，使核心寡糖变成甘露糖 6-磷酸。 能够测定寡糖的序列 如何测定糖蛋白的寡糖结构以及蛋白质与寡糖连接的位点吗？多数测定方法采用酶切，这些 酶能够断裂特定类型的糖苷键。 第一步将寡糖与蛋白质分开。例如 N-连接的寡糖可以用 N-糖苷酶 F 处理，释放寡糖。N-糖 苷酶 F 能够断裂寡糖与蛋白质之间的 N-糖苷键。然后分离寡糖并进行分析。MALDI-TOF 或其它 质谱技术能够确定寡糖的分子量。但是寡糖结构不同，但寡糖的质量却可能相同。用特异性不同 的糖苷酶处理，可以获得更多信息。例如，1,4-糖苷酶仅水解半乳糖基的糖苷键（图 11.25）。 酶切产物可以用质谱测定分子量。用不同的糖苷酶重复上述操作可以确定寡糖的结构。 蛋白酶用于确定蛋白质的糖基化位点。糖苷酶处理前后的蛋白质用特异蛋白酶裂解，然后层 析方法分析蛋白酶裂解肽段，就能找出糖基化肽段。因为同一多肽糖基化后的层析行为与未糖基 化肽段明显不同。质谱分析或直接测定糖基化肽段的氨基酸序列能够确定蛋白质糖基化位点所在 的氨基酸序列。进一步分析可以确定糖基化的具体位点。 糖基化显著增加了蛋白组的复杂性。一个蛋白质有几个潜在的糖基化位点可以有多种糖基化 形式（通常用 glycoform 表示)。各种细胞，或同一细胞在不同的发育阶段，同一蛋白的糖基化形 式可能不同。我们已经测定了人类全基因组的核苷酸序列，现在已经开始认真研究更为复杂的蛋 白组，包括特异修饰蛋白的生物学功能