本原理相同,即在染色前先用媒染剂处理,让它沉积在鞭毛上,使鞭毛直径加粗,然后再进 行染色。常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成 【材料】假单细胞菌( Pseudomonas sp.)斜面菌种。 Leifson染色液、香柏油、二甲苯。 载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号笔、镊子、接种环,显微镜 【方法】 1清洗玻片选择光滑无裂痕的玻片,最好选用新的。为了避免玻片相互重叠,应将玻 片插在专用金属架上,然后将玻片置洗衣粉过滤液中(洗衣粉煮沸后用滤纸过滤,以除去粗 颗粒),煮沸20min。取出稍冷后用自来水冲洗、晾干,再放入浓洗液中浸泡5-6天,使用 前取出玻片,用自来水冲去残酸,再用蒸馏水洗。将水沥干后,放入95%乙醇中脱水 2.菌液的制备及制片:在染色前将待染细菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培养基斜面上(培 养基表面湿润,斜面基部含有冷凝水)连续移接3-5代,以增强细菌的运动力。最后一代菌 种放恒温箱中培养12-16h。然后,用接种环挑取斜面与冷凝水交接处的菌液数环,移至盛 有1—2ml无菌水的试管中,使菌液呈轻度混浊。将该试管放在37℃恒温箱中静置10min(放 置时间不宜太长,否则鞭毛会脱落),让幼龄菌的鞭毛松展开。然后,吸取少量菌液滴在洁 净玻片的一端,立即将玻片倾斜,使菌液缓慢地流冋另一端,用吸水纸吸去多余的菌液。涂 片放空气中自然干燥 用于鞭毛染色的菌体也可用半固体培养基培养。方法是将0.3-04%的琼脂肉膏培养基熔 化后倒入无菌平皿中,待凝固后在平板中央点接活化了3-4代的细菌,恒温培养12-16h后 取扩散菌落的边缘制作涂片。 3. Leifson染色法 ①加染色液使染料覆盖涂片 ②水洗:在没有倾去染料的情况下,就用蒸馏水轻轻地冲去染料,否则会增加背景的沉 ③干燥:自然干燥。 4镜检先低倍观察,再高倍观察,最后用油镜观察,要多找一些视野,不要企图在1-2 个视野中就能看到细菌的鞭毛 【结果】菌体和鞭毛均染成红色。 【注意事项】 1. Leifson染色法受菌种、菌龄和室温等因素的影响,且染色液须经15-20次过滤,要 掌握好染色条件必须经过一些摸索。 2.染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。 3细菌鞭毛极细,很易脱落,在整个操作过程中,必须仔细小心,以防鞭毛脱落。 五、细菌动力的观察 细菌不染色进行镜检,可观察细菌在自然生活状态下的大小、形态、活动等,但主要用 于观察细菌的动力。细菌不染色时呈无色半透明,在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环 境的不同进行观察。细菌的动力是有鞭毛细菌的特征,因此观察细菌有无动力是鉴别细菌的9 本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进 行染色。常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。 【材料】假单细胞菌（Pseudomonas sp.）斜面菌种。Leifson 染色液、香柏油、二甲苯。 载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号笔、镊子、接种环，显微镜。 【方法】 1.清洗玻片 选择光滑无裂痕的玻片，最好选用新的。为了避免玻片相互重叠，应将玻 片插在专用金属架上，然后将玻片置洗衣粉过滤液中（洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗 颗粒），煮沸 20min。取出稍冷后用自来水冲洗、晾干，再放入浓洗液中浸泡 5—6 天，使用 前取出玻片，用自来水冲去残酸，再用蒸馏水洗。将水沥干后，放入 95%乙醇中脱水。 2.菌液的制备及制片：在染色前将待染细菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培养基斜面上（培 养基表面湿润，斜面基部含有冷凝水）连续移接 3-5 代，以增强细菌的运动力。最后一代菌 种放恒温箱中培养 12—16h。然后，用接种环挑取斜面与冷凝水交接处的菌液数环，移至盛 有 1—2ml 无菌水的试管中，使菌液呈轻度混浊。将该试管放在 37℃恒温箱中静置 10min（放 置时间不宜太长，否则鞭毛会脱落），让幼龄菌的鞭毛松展开。然后，吸取少量菌液滴在洁 净玻片的一端，立即将玻片倾斜，使菌液缓慢地流向另一端，用吸水纸吸去多余的菌液。涂 片放空气中自然干燥。 用于鞭毛染色的菌体也可用半固体培养基培养。方法是将 0.3-0.4%的琼脂肉膏培养基熔 化后倒入无菌平皿中，待凝固后在平板中央点接活化了 3-4 代的细菌，恒温培养 12-16h 后， 取扩散菌落的边缘制作涂片。 3.Leifson 染色法 ①加染色液使染料覆盖涂片。 ②水洗：在没有倾去染料的情况下，就用蒸馏水轻轻地冲去染料，否则会增加背景的沉 淀。 ③干燥：自然干燥。 4.镜检 先低倍观察，再高倍观察，最后用油镜观察，要多找一些视野，不要企图在 1-2 个视野中就能看到细菌的鞭毛。 【结果】菌体和鞭毛均染成红色。 【注意事项】 1. Leifson 染色法受菌种、菌龄和室温等因素的影响，且染色液须经 15-20 次过滤，要 掌握好染色条件必须经过一些摸索。 2.染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。 3.细菌鞭毛极细，很易脱落，在整个操作过程中，必须仔细小心，以防鞭毛脱落。 五、细菌动力的观察 细菌不染色进行镜检，可观察细菌在自然生活状态下的大小、形态、活动等，但主要用 于观察细菌的动力。细菌不染色时呈无色半透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环 境的不同进行观察。细菌的动力是有鞭毛细菌的特征，因此观察细菌有无动力是鉴别细菌的