包括去除外源性RNA酶的污染和抑制内源性RNA酶活性。主要是采用RNA 酶的阻抑蛋白 RNasin和强力的蛋白质变性剂盐酸胍或异硫氰酸胍抑制内源性 RNA酶,采用焦碳酸二乙酯(DEPC)去除外源性RNA酶 RNA提取的关键 真核细胞RNA的提取过程有四个关键点,即①样品(细胞或组织)的有 效破碎;②有效地使核蛋白复合体变性;③对内源RNA酶的有效抑制;④有 效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离;其中最关键的是抑制RNA酶活 性。提取的RNA可以用于核酸杂交、cDNA合成以及体外翻译等。 二、组织RNA提取的基本步骤 1.仪器:匀浆器、低温离心机、离心管。 2试剂:氯仿、75%乙醇、异丙醇、DEPC溶液、1%甲醛变性胶、37%甲 醛、3%过氧化氢、甲酰胺、RNA上样缓冲液。 3.主要步骤 (1)取组织50-100mg,加0.8 mI trizol冲洗匀浆器,移入同一离心管, 冰上静置5min (2)加0,2m氯仿,充分震荡混匀,静置3min,4℃,12000g×15min离 心。弃沉淀。 (3)取上清,加入0.5ml异丙醇,颠倒混匀。一20℃静置2h,4℃, 12000g×10min离心。 (4)弃上清,取沉淀,加入lml75%乙醇溶液,漂洗沉淀,4℃,7500g×5min 离心 (5)弃上清,沉淀真空干燥10min。 (6)加40μ L DEPC溶液,充分溶解RNA 4结果鉴定 (1)紫外分光光度计检测:取RNA溶解液,按一定比例稀释后,紫外 分光光度计测定260mm、280nmOD值,计算OD260OD280比值,如果比值在 17~2.0:1之间,说明RNA纯度可4 包括去除外源性 RNA 酶的污染和抑制内源性 RNA 酶活性。主要是采用 RNA 酶的阻抑蛋白 RNasin 和强力的蛋白质变性剂盐酸胍或异硫氰酸胍抑制内源性 RNA 酶，采用焦碳酸二乙酯（DEPC）去除外源性 RNA 酶。 一、RNA 提取 的关键 真核细胞 RNA 的提取过程有四个关键点，即①样品（细胞或组织）的有 效破碎；②有效地使核蛋白复合体变性；③对内源 RNA 酶的有效抑制；④有 效地将 RNA 从 DNA 和蛋白混合物中分离；其中最关键的是抑制ＲＮＡ酶活 性。提取的 RNA 可以用于核酸杂交、cDNA 合成以及体外翻译等。 二、组织 RNA 提取的基本步骤 1.仪器：匀浆器、低温离心机、离心管。 2.试剂：氯仿、75%乙醇、异丙醇、DEPC 溶液、1%甲醛变性胶、37%甲 醛、3%过氧化氢、甲酰胺、RNA 上样缓冲液。 3.主要步骤 （1）取组织 50~100mg，加 0.8ml Trizol 冲洗匀浆器，移入同一离心管， 冰上静置 5min。 （2）加 0.2ml 氯仿，充分震荡混匀，静置 3min，4℃，12000g×15min 离 心。弃沉淀。 （3）取上清，加入 0.5ml 异丙醇，颠倒混匀。－20℃静置 2h，4℃， 12000g×10min 离心。 （4）弃上清，取沉淀，加入 1ml 75%乙醇溶液，漂洗沉淀，4℃，7500g×5min 离心。 （5）弃上清，沉淀真空干燥 10min。 （6）加 40μl DEPC 溶液，充分溶解 RNA。 4.结果鉴定 （1）紫外分光光度计检测：取 RNA 溶解液，按一定比例稀释后，紫外 分光光度计测定 260nm、280nmOD 值，计算 OD260/OD280 比值，如果比值在 1.72.0：1 之间，说明 RNA 纯度可