8.DNA溶液再加等体积15mol/LTES饱和酚抽提一次,按6、7离心 并吸至另一离心管。 9加等体积氯仿/异戊醇按步骤(5、6)抽提,离心5min 10吸出DNA溶液后,再步骤(9)抽提一次。 1l)用吸管将DNA溶液移至 Eppendorf中,冰浴至0℃ 12加2.5倍体积95%冷乙醇震摇,可见DNA白色沉淀析出 13用75%冷乙醇清洗3~4次 14.室温干燥或冷冻干燥DNA。 15加适量TE溶液溶解DNA。 四、结果鉴定 1.紫外分光光度计检测:可检测DNA的纯度和含量。一般而言核酸在 260nm时吸光度最大,而蛋白质在280nm时吸光度最大。取2u1DNA溶解液, 适量稀释,紫外分光光度计测定260nm、280nmOD值,计算OD260/OD280 比值,比值在1.7-~2.0:1之间,说明DNA纯度可。在260nm处,1OD双链DNA 的浓度为5oμg/ml,据此可计算DNA的浓度(g/ml)=50×(OD260)×稀 释倍数。 2.电泳检测:可检测核酸的完整性和大小。取2μlDNA溶解液与适量上 样缓冲液混合后,经1%琼脂糖凝胶电泳。电泳结束后紫外光下观察,拍照; 如果观察到一条清晰的电泳带,无明显的拖尾,说明DNA完整性好。 第二节真核细胞总RNA的分离提取 RNA是基因表达产物,由以下几类分子组成,TRNA(占细胞总RNA的 80%~85%)、tRNA和核内小分子RNA(占10~15%)、mRNA(占1~5%) 其中mRNA是分子生物学的主要研究对象,分离制备mRNA是克隆基因,分 析基因表达以及建立cDNA文库的首要步骤 真核细胞总RNA分离提取的目的是要获得高纯度的具有充分长度的 RNA分子,包括RNA的纯度和完整性。RNA分离的关键是尽量减少RNA酶 的污染。RNA酶活性非常稳定,分布广泛,除细胞内源性的RNA酶外,环境 中也存在RNA酶。因此在提取RNA时,应尽量创造一个无RNA酶的环境,3 8. DNA 溶液再加等体积 15 mo1／L TES 饱和酚抽提一次，按 6、7 离心 并吸至另一离心管。 9.加等体积氯仿/异戊醇按步骤（5、6）抽提，离心 5min。 10.吸出 DNA 溶液后，再步骤（9）抽提一次。 11.用吸管将 DNA 溶液移至 Eppendorf 中，冰浴至 0℃。 12.加 2.5 倍体积 95%冷乙醇震摇，可见 DNA 白色沉淀析出。 13.用 75%冷乙醇清洗 3～4 次。 14.室温干燥或冷冻干燥 DNA。 15.加适量 TE 溶液溶解 DNA。 四、结果鉴定 1．紫外分光光度计检测：可检测 DNA 的纯度和含量。一般而言核酸在 260nm 时吸光度最大，而蛋白质在 280nm 时吸光度最大。取 2μl DNA 溶解液， 适量稀释，紫外分光光度计测定 260nm、280nmOD 值，计算 OD260/OD280 比值，比值在 1.72.0:1 之间，说明 DNA 纯度可。在 260nm 处，1OD 双链 DNA 的浓度为 50g /ml，据此可计算 DNA 的浓度（g /ml）=50×(OD260) × 稀 释倍数。 2．电泳检测：可检测核酸的完整性和大小。取 2μl DNA 溶解液与适量上 样缓冲液混合后，经 1%琼脂糖凝胶电泳。电泳结束后紫外光下观察，拍照； 如果观察到一条清晰的电泳带，无明显的拖尾，说明 DNA 完整性好。 第二节 真核细胞总 RNA 的分离提取 RNA 是基因表达产物，由以下几类分子组成，rRNA（占细胞总 RNA 的 80%～85%）、tRNA 和核内小分子 RNA（占 10～15%）、mRNA（占 1～5%）。 其中 mRNA 是分子生物学的主要研究对象，分离制备 mRNA 是克隆基因，分 析基因表达以及建立 cDNA 文库的首要步骤。 真核细胞总 RNA 分离提取的目的是要获得高纯度的具有充分长度的 RNA 分子，包括 RNA 的纯度和完整性。RNA 分离的关键是尽量减少 RNA 酶 的污染。RNA 酶活性非常稳定，分布广泛，除细胞内源性的 RNA 酶外，环境 中也存在 RNA 酶。因此在提取 RNA 时，应尽量创造一个无 RNA 酶的环境