裂解过程中对核酸的破坏(如EDTA)、维持核酸结构的稳定(如NaCI)。裂 解体系中还可以加入蛋白酶:利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段,促进核酸 与蛋白质的分开,便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸 、纯化 根据DNA本身的特征使用不同方法进行核酸提纯。 三、DNA提取的实验步骤 (一)材料与设备 试剂消化液(100 mmolL NaCl 10mmol/L Tris-HCl,pH8.0,25mmol/L EDIA,0.5%SDS,0.1mg/ml蛋白酶K);pH8.0,25 mMo/L EDtA;PBS; TES饱和酚:氯仿:异戊醇;95%乙醇溶液;70%乙醇溶液;TE;0.1%SDS; lpg/ mI rNa酶; 2仪器培养皿、培养瓶、微量离心管、滴管;刻度吸管;加样器;枪头: 离心机、液氮罐、组织匀浆器、恒温培养箱 (二)主要步骤 1如果材料为组织块,可将组织块(约200-1000mg)剪碎后,置入液氮 中。随后用冰冷的组织捣碎器捣碎,每100mg组织加入1,2m消化液 (100mmol/L NaCl, 10mmol/L Tris-HCl, pH8.0, 25mmoI/L EDTA,0. 5%SDS 0.lmg/m蛋白酶K)。 2如果材料是悬浮细胞,收集细胞于微量离心管中,500g×5min离心;如 果材料是贴壁细胞,弃上清后,胰酶消化收集细胞,500g×5min离心。随后用 冰冷的PBS缓冲液洗涤细胞,500g×5min离心,弃上清,重复一次,并用 倍体积的消化液重悬细胞 3组织或细胞混悬液移入带盖的离心管中,50℃消化12~18h。 4冷却至4℃,加等体积15mol/LTES饱和酚。 5轻轻振摇,使水相和酚层充分混匀。 6.4℃5000pm~8000rpm离心15min~20min。此时DNA溶液在上层,酚 位于下层,中间是变性蛋白层。 7用吸管小心吸取上层粘稠溶液,移至另一离心管。注意尽量不要带出中 间蛋白层。2 裂解过程中对核酸的破坏 (如 EDTA)、维持核酸结构的稳定 (如 NaCl) 。裂 解体系中还可以加入蛋白酶；利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段，促进核酸 与蛋白质的分开，便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸。 二、纯化 根据 DNA 本身的特征使用不同方法进行核酸提纯。 三、DNA 提取的实验步骤 （一）材料与设备 1.试剂 消化液（100mmol/L NaCl,10mmol/L Tris-HCl，pH8.0，25mmol/L EDTA，0.5%SDS，0.1mg/ml 蛋白酶 K）；pH8.0，25mmol/L EDTA；PBS； TES 饱和酚；氯仿；异戊醇； 95%乙醇溶液；70%乙醇溶液；TE；0.1%SDS； 1μg/ml RNA 酶； 2.仪器 培养皿、培养瓶、微量离心管、滴管；刻度吸管；加样器；枪头； 离心机、液氮罐、组织匀浆器、恒温培养箱 （二）主要步骤 1.如果材料为组织块，可将组织块（约 200~1000mg）剪碎后，置入液氮 中。随后用冰冷的组 织捣碎器捣碎， 每 100mg 组织加入 1.2ml 消化液 （100mmol/L NaCl,10mmol/L Tris-HCl，pH8.0，25mmol/L EDTA，0.5%SDS， 0.1mg/ml 蛋白酶 K）。 2.如果材料是悬浮细胞，收集细胞于微量离心管中，500g×5min 离心；如 果材料是贴壁细胞，弃上清后，胰酶消化收集细胞，500g×5min 离心。随后用 冰冷的 PBS 缓冲液洗涤细胞，500g×5min 离心，弃上清，重复一次，并用一 倍体积的消化液重悬细胞。 3.组织或细胞混悬液移入带盖的离心管中，50℃消化 12～18h。 4.冷却至 4℃，加等体积 15 mo1／L TES 饱和酚。 5.轻轻振摇，使水相和酚层充分混匀。 6. 4℃5000rpm～8000rpm 离心 15min～20min。此时 DNA 溶液在上层，酚 位于下层，中间是变性蛋白层。 7.用吸管小心吸取上层粘稠溶液，移至另一离心管。注意尽量不要带出中 间蛋白层