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各取10mL标准氧化液于两个100mL容量瓶中,分别标记“标 准”、“标准空白”:各取10mL样品氧化液于两个100mL容量瓶中, 分别标记“样品”、“样品空白”。 于标准空白及样品空白中各加入5mL硼酸-乙酸钠溶液,摇动 15min,用水稀释至刻度,4℃冰箱中放置2-3小时,取出备用。 于样品及标准溶液中各加入500gL乙酸钠溶液5mL,用水稀释 至刻度,备用。 硼酸的作用:食物中的丙酮酸,也与邻苯二胺反应生成一种荧光 物质,干扰测定。加入硼酸后,硼酸与脱氢型抗坏血酸发生螯合 作用生成的硼酸脱氢型螯合物不与邻苯二胺作用。丙酮酸则不会 和硼酸发生此作用,仍可以与邻苯二胺生成荧光物质。因此加入 硼酸-乙酸钠后溶液的荧光强度为丙酮酸与邻苯二胺生成的荧光 物质产生的,为总抗血酸测定的背景值。 样品测定 取上述标准溶液0.50,1.00,1.50,2.00于10mL比色管中,再用水补充 至2.00mL: 另取标准空白溶液、样品空白溶液及样品溶液各2.00mL,分别置 于10mL比色管中: 向各管中迅速加入5.00mL邻苯二胺溶液,振摇混合,在室温下反 应35min 以标准系列中浓度最大管在安捷伦荧光分光光度计上找最大激发 波长和最大发射波长。在最大发射波长下测定各管的荧光强度。以浓
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