（二)试剂 1.限制性内切酶 2.电泳缓冲液：1XTAE 3.凝胶加样缓冲液(6× 漠盼蓝 0.25% 蔗糖 40% 4.分子量标准 5.溴化乙啶溶液 0.5μgml 6.琼脂糖 四、 实验内容与方法 (一)DNA的限制性酶切 1.取一个1.5mL的离心管，按顺序加入： DNA 1μg 10Xbuffer 2μL 限制性内切酶 1μ 蒸馏水 定容至20μL 2.轻轻摇匀，37℃温浴1小时 3.70C10分钟，灭活限制性内切酶。或加入6×加样缓中液4μ 终止反应。 4.取10μL进行电泳检测。 (二)DNA的琼脂糖凝胶电泳 1.取50×TAE缓冲液10ml加水至500ml,配制成1×TAE稀释缓冲液， 待用。 2.胶液的制备：称取0.3g琼脂糖，置于100ml推形瓶中加入30m 1×TE稀释缓冲液，放入微波炉里（或电炉上）加热至琼脂糖全部熔化，取出 摇匀。此为1%琼脂糖凝胶液。加热过程中要不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂 糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜，以减少水份蒸发。 3.胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏（宽约I©m)紧密封 住。将封好的胶槽置于水平支持物上，插上样品梳子，注意观察梳子齿下缘应 与胶槽底面保持1mm左右的间隙。 向冷却至50~60℃的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭(EB)溶液使其终浓度 为0.5μgml(也可不把EB加入凝胶中，而是电泳后再用05μgml的EB溶 液浸泡染色)。用移液器吸取少量融化的琼脂糖凝胶封橡皮膏内侧，待琼脂糖 溶液凝固后将剩余的琼脂糖小心地倒入胶槽内，使胶液形成均匀的胶层。倒 胶时的温度不可太低，否则凝固不均匀，速度也不可太快，否则容易出现气泡， 待胶完全凝固后拨出梳子，注意不要损伤梳底部的凝胶，然后向槽内加入 1×TE稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面。14 （二） 试剂 1. 限制性内切酶 2. 电泳缓冲液：1×TAE 3. 凝胶加样缓冲液（6×） 溴酚蓝 0.25% 蔗 糖 40% 4. 分子量标准 5. 溴化乙啶溶液 0.5μg/mL 6. 琼脂糖 四、 实验内容与方法 （一） DNA 的限制性酶切 1. 取一个 1.5mL 的离心管，按顺序加入： DNA 1μg 10×buffer 2μL 限制性内切酶 1μL 蒸馏水 定容至 20μL 2. 轻轻摇匀，37℃温浴 1 小时。 3. 70℃ 10 分钟，灭活限制性内切酶。或加入 6×加样缓冲液 4μL 终止反应。 4. 取 10μL 进行电泳检测。 （二） DNA 的琼脂糖凝胶电泳 1. 取 50×TAE 缓冲液 10ml 加水至 500ml,配制成 1×TAE 稀释缓冲液， 待用。 2. 胶液的制备：称取 0.3g 琼脂糖，置于 100ml 锥形瓶中加入 30ml 1×TAE 稀释缓冲液，放入微波炉里(或电炉上)加热至琼脂糖全部熔化，取出 摇匀。此为 1％琼脂糖凝胶液。加热过程中要不时摇动,使附于瓶壁上的琼脂 糖颗粒进入溶液。加热时应盖上封口膜,以减少水份蒸发。 3. 胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用橡皮膏(宽约 1cm)紧密封 住。将封好的胶槽置于水平支持物上,插上样品梳子,注意观察梳子齿下缘应 与胶槽底面保持 1mm 左右的间隙。 向冷却至 50~60℃的琼脂糖胶液中加入溴化乙锭(EB)溶液使其终浓度 为 0.5μg /ml(也可不把 EB 加入凝胶中，而是电泳后再用 0.5μg/ml 的 EB 溶 液浸泡染色)。用移液器吸取少量融化的琼脂糖凝胶封橡皮膏内侧,待琼脂糖 溶液凝固后将剩余的琼脂糖小心地倒入胶槽内,使胶液形成均匀的胶层。倒 胶时的温度不可太低,否则凝固不均匀,速度也不可太快,否则容易出现气泡。 待胶完全凝固后拨出梳子,注意不要损伤梳底部的凝胶,然后向槽内加入 1×TAE 稀释缓冲液至液面恰好没过胶板上表面