20Op至近50kb的DNA片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的 电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-50Obp)效果较好，其分辩力极高 甚至相差1bp的DNA片段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快，可容纳相对 大量的DNA但制备和操作比琼脂融凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装 置进行电泳。目前，一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA 电泳。 琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质，其密度取决于琼 脂糖的浓度。在电场中，在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移，其迁移 速率由下列多种因素决定 (1)DNA的分子大小 线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子 量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中泳动，因 而迁移得越慢。 (2)琼脂糖浓度 一个给定大小的线状DNA分子，其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶 中各不相同。DNA电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的 选择取决于DNA分子的大小。分离小于O.5b的DNA片段所需胶浓度是 1.21.5%.分离大于10kb的DNA分子所需胶浓度为0.30.7%.DNA片段大 小间于两者之间则所需胶浓度为0.81.0% (3)DNA分子的构象 DNA分子处于不同构象时，它在电场中移动距离不仅和分子量有关，还 和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋DNA在琼脂糖凝胶 中移动速度是不一样的，超螺旋DNA移动最快，开环DNA移动最慢 (4)电源电压 在低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。但是随着电 场强度的增加，不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，片 段越大，因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大，因此电压增加，琼脂糖 凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA 片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm 电泳过程中或结束后直接利用荧光染料EB(溴化乙啶)对琼脂糖凝胶 进行染色。EB是一种扁平的分子，可以嵌入双链核酸配对的碱基之间，占 据一个碱基的位置，在紫外光的激发下能发出桔红色荧光。通过荧光条带的 位置即可检测出DNA分子。EB是一种诱变剂，所以操作时一定要小心不 要沾到皮肤上。 三、实验用品 (一)仪器：恒温水浴锅、电泳仪、电泳槽，梳子、紫外灯（凝胶成 像系统)。 13 200bp 至近 50kb 的 DNA 片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的 电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段 DNA(5-500bp)效果较好,其分辩力极高, 甚至相差 1bp 的 DNA 片段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快,可容纳相对 大量的 DNA,但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装 置进行电泳。目前,一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行 DNA 电泳。 琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼 脂糖的浓度。在电场中,在中性 pH 值下带负电荷的 DNA 向阳极迁移,其迁移 速率由下列多种因素决定： （1） DNA 的分子大小： 线状双链 DNA 分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与 DNA 分子 量对数成反比，分子越大则所受阻力越大，也越难于在凝胶孔隙中泳动，因 而迁移得越慢。 （2） 琼脂糖浓度 一个给定大小的线状 DNA 分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶 中各不相同。DNA 电泳迁移率的对数与凝胶浓度成线性关系。凝胶浓度的 选择取决于 DNA 分子的大小。分离小于 0.5kb 的 DNA 片段所需胶浓度是 1.2~1.5%,分离大于 10kb 的 DNA 分子所需胶浓度为 0.3~0.7%, DNA 片段大 小间于两者之间则所需胶浓度为 0.8~1.0%。 （3） DNA 分子的构象 DNA 分子处于不同构象时,它在电场中移动距离不仅和分子量有关,还 和它本身构象有关。相同分子量的线状、开环和超螺旋 DNA 在琼脂糖凝胶 中移动速度是不一样的,超螺旋 DNA 移动最快, 开环 DNA 移动最慢。 （4） 电源电压 在低电压时,线状 DNA 片段的迁移速率与所加电压成正比。但是随着电 场强度的增加，不同分子量的 DNA 片段的迁移率将以不同的幅度增长，片 段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大，因此电压增加，琼脂糖 凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于 2kb 的 DNA 片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过 5v/cm。 电泳过程中或结束后直接利用荧光染料 EB（溴化乙啶）对琼脂糖凝胶 进行染色。EB 是一种扁平的分子，可以嵌入双链核酸配对的碱基之间，占 据一个碱基的位置，在紫外光的激发下能发出桔红色荧光。通过荧光条带的 位置即可检测出 DNA 分子。EB 是一种诱变剂，所以操作时一定要小心不 要沾到皮肤上。 三、 实验用品 （一） 仪器：恒温水浴锅、电泳仪、电泳槽，梳子、紫外灯（凝胶成 像系统）