二、实验原理 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有 否污染肠道致病菌的可能。 三、实验材料 1、设备和材料 温箱、水浴锅、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻 片、接种针 2、培养基及试剂 乳糖—胆盐发酵管、乳糖发酵管、蛋白胨水、靛基质试剂、麦康凯、伊红美蓝琼脂(EMB)、 远腾氏琼脂、革兰氏染色液 3、样品 发酵香肠 四、实验方法与步骤 1、采样及稀释 ①以无菌操作将检样 25g 放于含有 225ml 灭菌生理盐水,用均质器,以 8 000~10000r/min 的速度处理 1min,做成 1∶10 的均匀稀释液。 ②用 1ml 灭菌吸管吸取 1:10 稀释液 1ml,注入含有 9ml 灭菌生理盐水或其他稀释液的试管 内,振摇混匀,做成 1:100 的稀释液,换用 1 支 1ml 灭菌吸管,按上述操作依次作 10 倍 递增稀释液 ③根据食品卫生要求或对检验样品污染情况估计,选择三个稀释度,每个稀释度接种 3 管。 也可直接用样品接种。 2. 乳糖初发酵试验 即通常所说的假定试验。其目的在于检查样品中有无发酵乳糖产生气体的细菌。 将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在 1ml 以上者,用双料乳糖胆盐发酵管; 1ml 及 1ml 以下者,用单料乳糖发酵管。每一个稀释度接种 3 管,置(36±1)0C 温箱内, 培养(24±2)h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产生者, 则按下列程续进行 3.分离培养