(1)双层法 1)吸取经适当稀释的一抗加在经过固定的组织细胞切(涂、爬)片上,在 染色用的湿盒中37℃孵育30min。 2)用pH72的001MPBS洗涤两次,每次5min,最后再用吸水纸洗去残 留的液体 3)滴加荧光标记的二抗,置于湿盒中37℃孵育30min,再用PBS洗涤两次, 每次5min,用吸水纸吸去残留的液体 4)缓冲甘油封固,镜检 (2)夹心法:是一种用未标记的抗原检测组织或细胞中的抗体的方法 1)滴加经适当稀释的特异性抗原于经过固定的组织细胞切(涂)片上,在 染色用的湿盒中37℃孵育30min 2)用pH72的001MPBS洗涤两次,每次5min,最后再用吸水纸洗去残 留的液体。 3)滴加可与抗原结合的特异性荧光标记抗体,置于湿盒中37℃孵育30min 4)用pH7.2的001MPBS洗涤两次,每次5min,最后再用吸水纸洗去残 留的液体。 5)缓冲甘油封镜,镜检。 (三)免疫荧光染色的检测 免疫荧光标记的组织细胞玻片可用荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜等 进行检测 四、免疫酶细胞化学技术 免疫酶细胞化学技术是最常用的免疫细胞化学技术,借助于酶细胞化学技术 而非荧光标记来检测抗原的存在。主要有酶标抗体法和非标记抗体酶法两种主要 形式。 (一)酶标抗体法 1.酶标抗体的制备可用于抗体标记的酶一般应具有以下几点:①酶催化 的底物必须是特异性的,容易被显示,易于在光镜下或电镜下观察;②用于免疫 化学的酶要易于获得,便于商品化和标准化;③在中性pH值时,酶应比较稳定, 标记在抗体上的酶应在1~2年内活性不变;④所形成的终产物沉淀必须稳定,（1）双层法 1）吸取经适当稀释的一抗加在经过固定的组织细胞切（涂、爬）片上，在 染色用的湿盒中 37℃孵育 30min。 2）用 pH 7.2 的 0.01M PBS 洗涤两次，每次 5min，最后再用吸水纸洗去残 留的液体。 3）滴加荧光标记的二抗，置于湿盒中 37℃孵育 30min，再用 PBS 洗涤两次， 每次 5min，用吸水纸吸去残留的液体。 4）缓冲甘油封固，镜检。 （2）夹心法：是一种用未标记的抗原检测组织或细胞中的抗体的方法。 1）滴加经适当稀释的特异性抗原于经过固定的组织细胞切（涂）片上，在 染色用的湿盒中 37℃孵育 30min。 2）用 pH 7.2 的 0.01M PBS 洗涤两次，每次 5min，最后再用吸水纸洗去残 留的液体。 3）滴加可与抗原结合的特异性荧光标记抗体，置于湿盒中 37℃孵育 30min。 4）用 pH 7.2 的 0.01M PBS 洗涤两次，每次 5min，最后再用吸水纸洗去残 留的液体。 5）缓冲甘油封镜，镜检。 （三）免疫荧光染色的检测 免疫荧光标记的组织细胞玻片可用荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜等 进行检测。 四、免疫酶细胞化学技术 免疫酶细胞化学技术是最常用的免疫细胞化学技术，借助于酶细胞化学技术 而非荧光标记来检测抗原的存在。主要有酶标抗体法和非标记抗体酶法两种主要 形式。 （一）酶标抗体法 1．酶标抗体的制备 可用于抗体标记的酶一般应具有以下几点：①酶催化 的底物必须是特异性的，容易被显示，易于在光镜下或电镜下观察；②用于免疫 化学的酶要易于获得，便于商品化和标准化；③在中性 pH 值时，酶应比较稳定， 标记在抗体上的酶应在 1～2 年内活性不变；④所形成的终产物沉淀必须稳定