硅胶上，仔细拌匀，水浴上蒸干，碾细，通过一个长颈漏斗小心加在柱顶，轻轻垂直顿击， 待样品表面平整不拌动时，上面再盖约 1~2cm 高的空白硅胶，再加盖一园形滤纸片，压紧。 （3）洗脱 先检查从空压机至层析柱各阀门管道是否正常，关紧各个阀门，开动空压 机至额定压力（5.8kg/cm2）待用。用滴管顺层析柱柱壁仔细加入少量洗脱剂（环已烷-惭酸 乙酯-二乙胺/6：2：0.8），当液面达到一定高度时，再一次加入其余洗脱剂（共约 250ml）， 迅速在柱顶上装上玻璃标口塞接头，用铁夹压紧（防加压时接头冲开），小心开启空压机阀 门，再开针形阀和空气过滤减压器，（注意：压力过大。玻璃柱会炸，一般 2kg 是安全的， 必要时可戴防护面罩）调动所需压力，0.6~1.2kg/cm2，约 40 分钟后流出，控制流速 1ml/分， 每 10 分钟左右一管，收 12~15 份，洗脱全过程约 3 小时。 （4）检查 各流份分别移入小玻璃蒸发器中，于水浴上浓缩，分别通过 TLC 检查，吸 附剂：硅胶 G，展开剂：环已烷-乙酸乙酯-二乙胺/6：3：1，改良碘化铋钾试剂喷雾显色， 以汉防已甲素、乙素为标准品对照，合并相同组分，分别获得甲、乙素粗品，用丙酮重结晶， 测定 mp。 四、鉴定方法 1．衍生物制备 取汉防已甲素 0.2g，溶于 2ml（丙酮中，滴加苦味酸饱和水溶液至不再折出黄色沉淀为 止，抽滤收集沉淀，顺次以少量水乙醚洗涤，乙醇重结晶，得汉防已甲素苦味酸盐，mp 235~242℃（dc）。 2．有机胺碱的 TLC 吸附剂：青岛海洋化工厂薄层层析硅胶 G，用 0.3%CMC-Na 水液制板，110℃活化 1 小 时。 样品：分出的汉防已甲素①、乙素②、总碱③ 展开剂：环己烷- EtoAc-NHEt2（6：2：1） 显色剂：改良碘化铋钾试剂（展开后用电吹风吹干再喷显色剂，以免二乙胺干扰） 现象：甲素显色后呈淡棕色，2 小时左右就褪色，而乙素呈棕色，久置不褪色，可帮助 其辨认