第一章蛋白质化学 通过氨基酸的滴定曲线,可用下列 Henderson- Hasselbalch方程求出各解 离基团的解离常数(pK,): pH= pk+ log 根据pK,可求出氨基酸的等电点,可由其等电点左右两个pK,值的算术 平均值求出。 中性及酸性氨基酸:pl=(pK1,+pK2,)2 中性氨基酸:pK1,为a一羧基的碱性氨基酸: pl=(pK2,+pK3,)2解离常数,pK2,为a一氨基的解离常数 酸性氨基酸:pK1,为a一羧基的解离常数,pK2,为侧链羧基的解离常数。 2由a氨基参加的反应: (1)亚硝酸反应:放出氮气,氮气的一半来自氨基氮,一半来自亚硝酸, 在通常情况下测定生成的氮气的体积量可计算氨基酸的量,此反应可用于测 定蛋白质的水解程度。 (2)与甲醛的反应:用过量的中性甲醛与氨基酸反应,可游离出氢离子, 然后用NaOH滴定,从消耗的碱量可以计算出氨基酸的含量。此法称为间接 滴定法 (3)与2,4-二硝基氟苯(2,4-DNFB)的反应( Sanger反应):生成 黄色的二硝基苯一氨基酸衍生物。 (4)与苯异硫氰酸酯(PITC)反应( Edman反应):生成苯乙内酰硫脲 氨基酸。 (5)与丹磺酰氯(DNS-Cl)的反应:生成荧光物质DNS一氨基酸 (4)(5)反应用于蛋白质的N一末端的测定。 3.a-羧基参加的反应 (1)与碱反应成盐 (2)与醇反应成酯: 4a-氨基与a-羧基共同参加的反应 与茚三酮的反应:除脯氨酸与羟脯氨酸外,可与其它氨基酸生成蓝紫色 化合物;脯氨酸与羟脯氨酸为黄色化合物 5侧链反应(颜色反应) (1)Mln反应:检测Tyr或含Tyr的蛋白质的反应 Millon试剂:汞的硝酸盐与亚硝酸盐溶液。产物:红色的化合物。 (2) Folin反应:检测Tyr或含Tr的蛋白质的反应 Foin试剂:磷钼酸、磷钨酸混合溶液。产物:蓝色的钼蓝、钨蓝。 (3)坂口反应:检测Arg或含Arg的蛋白质的反应 坂口试剂:α一萘酚的碱性次溴酸钠溶液。产物:砖红色的沉淀 (4) Pauly反应:检测His、Tyr及含His、Tr蛋白质的反应第一章 蛋白质化学 6 通过氨基酸的滴定曲线，可用下列 Henderson—Hasselbalch 方程求出各解 离基团的解离常数（pK，）： 根据 pK，可求出氨基酸的等电点，可由其等电点左右两个 pK，值的算术 平均值求出。 中性及酸性氨基酸：pI=(pK1，+pK2，)/2 中性氨基酸：pK1，为α—羧基的碱性氨基酸： pI=(pK2，+pK3，)/2 解离常数，pK2，为α—氨基的解离常数。 酸性氨基酸： pK1，为α—羧基的解离常数，pK2，为侧链羧基的解离常数。 2.由α-氨基参加的反应： （1）亚硝酸反应：放出氮气，氮气的一半来自氨基氮，一半来自亚硝酸， 在通常情况下测定生成的氮气的体积量可计算氨基酸的量，此反应可用于测 定蛋白质的水解程度。 （2）与甲醛的反应：用过量的中性甲醛与氨基酸反应，可游离出氢离子， 然后用 NaOH 滴定，从消耗的碱量可以计算出氨基酸的含量。此法称为间接 滴定法。 （3）与 2，4—二硝基氟苯（2，4—DNFB）的反应（Sanger 反应）：生成 黄色的二硝基苯—氨基酸衍生物。 （4）与苯异硫氰酸酯（PITC）反应（Edman 反应）：生成苯乙内酰硫脲 —氨基酸。 （5）与丹磺酰氯（DNS—Cl）的反应：生成荧光物质 DNS—氨基酸。 （4）（5）反应用于蛋白质的 N—末端的测定。 3.α-羧基参加的反应： （1）与碱反应成盐： （2）与醇反应成酯： 4.α-氨基与α-羧基共同参加的反应 与茚三酮的反应：除脯氨酸与羟脯氨酸外，可与其它氨基酸生成蓝紫色 化合物；脯氨酸与羟脯氨酸为黄色化合物。 5.侧链反应（颜色反应）： （1）Millon 反应：检测 Tyr 或含 Tyr 的蛋白质的反应。 Millon 试剂：汞的硝酸盐与亚硝酸盐溶液。产物：红色的化合物。 （2）Folin 反应：检测 Tyr 或含 Tyr 的蛋白质的反应。 Folin 试剂：磷钼酸、磷钨酸混合溶液。产物：蓝色的钼蓝、钨蓝。 （3）坂口反应：检测 Arg 或含 Arg 的蛋白质的反应。 坂口试剂：α—萘酚的碱性次溴酸钠溶液。产物：砖红色的沉淀。 （4）Pauly 反应：检测 His、Tyr 及含 His、Tyr 蛋白质的反应