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术和等比重技术,两者的原理是不同的。 (一)速率区带技术用速率区带技术分离样品依赖于样品中粒子或高分子的大小和 沉降速度的不同。如图3所示,把一层样品溶液铺于一种密度梯度介质液柱的顶部,样品在 液柱项部形成一个负梯度,不过底部存在着一个陡的正梯度,防止样品的过早沉降。离心力 作用下粒子在梯度介质中呈分离的区带状沉降,每一条区带粒子的特征是具有同一沉降速 度。根据不同的实验目的可以设计不同的梯度。 要使速率区带离心得到成功,样品粒子的密度必须大于梯度液柱中任一点的密度,并 且必须在区带到达离心管底部以前停止离心。以下列举了速率区带法的典型实验运转参数 (表1) 图3在水平式转头中进行速率区带分离 1.充满密度梯度溶液的高心管2样品加于梯度 项部 3.离心力作用下粒 子按照它们的质量以 不同的速度移动 表1速率区带法的典型实验和运转参数 样品 沉降系数 转头· 蔗糖梯度 转速 时间温度 (S) (%W/W) (hmn} 《小时) (c) 4,7 5-20 5 5 4,7,19 104 16 多核糖体(鼠肝) 80以上 sW50.1 10-50 50000 1.5 核糖体亚单位 30,50 sw50.1 10.40 50000 3 血清 4.7 sw50.1 10-20 50000 血清 4.7 SW50.1 35 50000 6 醇(大部分) 25-45 SW60 18 5 亚细胞组分(无线粒体 Sw27 25/35 27000 3 核糖体RNA(鼠肝) 1828 SW5OI 520 50000 5 核糖体RNA(鼠肝) 1828 SW60 10-40 60000 45术和等比重技术,两者的原理是不同的。 (一)速率区带技术 用速率区带技术分离样品依赖于样品中粒子或高分子的大小和 沉降速度的不同。如图 3 所示,把一层样品溶液铺于一种密度梯度介质液柱的顶部,样品在 液柱顶部形成一个负梯度,不过底部存在着一个陡的正梯度,防止样品的过早沉降。离心力 作用下粒子在梯度介质中呈分离的区带状沉降,每一条区带粒子的特征是具有同一沉降速 度。根据不同的实验目的可以设计不同的梯度。 要使速率区带离心得到成功,样品粒子的密度必须大于梯度液柱中任一点的密度,并 且必须在区带到达离心管底部以前停止离心。以下列举了速率区带法的典型实验运转参数 (表 1) 表 1 速率区带法的典型实验和运转参数 样 品 沉降系数 转头 * 蔗糖梯度 转 速 时 间 温度 (S) (%W/W) (r/min) (小时) (℃) 血清 4,7 SW60 5~20 60 000 5 5 血清 4,7,19 SW60 10~40 60 000 16 5 多核糖体(鼠肝) 80 以上 SW50.1 10~50 50 000 1.5 5 核糖体亚单位 30,50 SW50.1 10~40 50 000 3 5 血清 4,7 SW50.1 10~20 50 000 14 5 血清 4,7 SW50.1 3~5 50 000 6 5 酶(大部分) 2.5~4.5 SW60 10~40 60 000 18 5 亚细胞组分(无线粒体) SW27 25/35 27 000 3 5 核糖体 RNA(鼠肝) 18.28 SW50.1 5~20 50 000 5 5 核糖体 RNA(鼠肝) 18.28 SW60 10~40 60 000 4.5 5 1 2 3 图 3 在水平式转头中进行速率区带分离 1.充满密度梯度溶液的离心管 2.样品加于梯度 顶部 3.离心力作用下粒子按照它们的质量以 不同的速度移动
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