畜牧与兽医2020年第52卷第2期 2000 750 570bp M.DL000 Marker;1~3.PCR产物 图1水牛CART基因PCR产物电泳分析 M.DL2000 Marker;neg-1,neg-2,neg-3.阴性克隆PCR产物 os-1.阳性克隆PCR产物 图2水牛CART基因阳性单克隆PCR产物电泳分析 CGAGTTTCAGCACCATGGAGAGCC CTGCTACCTTTGCTGGGCGCCTTAGCCCA GCCGAGCTCCAGCCCCGAGCCCTGGACATCTACTCCGCCGTGGAGGATGCCTCC G AL A 0 E D A E L 0 PR A L D I FAAGAAGCTCAAGAGTAAACGTATTCCAATTT) YE K KYG 0 v: C AG E0C AV R K GKL 5 C AATTCCTTCCTCCTGAAGTGCTTATGAGGCACCCACGCTTCTCCATAAGCCCCCTCCCCACT NS FL LK C 图3水牛CART基因克隆测序及预测的蛋白编码 起始位点ATG 终止位点TGA 342bp 426bp 858bp 390bp 5°-UTR 外显子1 内含子 外显子2 内含子 外显子3 图4水牛CART基因组序列结构示意图 2.3水牛CART基因同源性及系统进化树分析 与猕猴相似程度为91%,与马、驴相似程度为85% NCBI序列相似性分析(htps:// blast.ncbi.nlm.与人类、野猪相似程度分别为81%、78%。Mega7.0 nih. gov/ Blast.cgi)对所得水牛序列与 GenBank中与美分析结果见图5,由图可知水牛与黄牛、牦牛和美洲 洲野牛、野牦牛、普通牛、羊、双峰驼与单峰驼、野野牛,以及绵羊最早聚为一类,同源性较高,说明 猪、马和驴、人类与猕猴基因序列进行比对分析,使CART基因在多胃反刍动物中保守性较强。单峰驼与 用Mega7.0软件构建系统进化树,参考序列及相似双峰驼、野猪、马与驴各聚为一类,共3条分支,与 性分析结果见表2。所得水牛CART基因序列与美洲牛羊共聚为一大分支,人类与猕猴聚为一类,为另 野牛、普通牛相似程度为100%,与野牦牛、羊相似大分支。聚类分析可见马与驴分化最早,最晚为单峰 程度为哭8%,与双峰驼、单峰驼相似程度为%,驼与双峰驼。Ｍ． ＤＬ２０００ Ｍａｒｋｅｒ； １～ ３􀆰 ＰＣＲ 产物 图 １ 水牛 ＣＡＲＴ 基因 ＰＣＲ 产物电泳分析 Ｍ． ＤＬ２０００ Ｍａｒｋｅｒ； ｎｅｇ－ １， ｎｅｇ － ２， ｎｅｇ － ３􀆰 阴性克隆 ＰＣＲ 产物； ｐｏｓ－１􀆰 阳性克隆 ＰＣＲ 产物 图 ２ 水牛 ＣＡＲＴ 基因阳性单克隆 ＰＣＲ 产物电泳分析 图 ３ 水牛 ＣＡＲＴ 基因克隆测序及预测的蛋白编码 图 ４ 水牛 ＣＡＲＴ 基因组序列结构示意图 ２􀆰 ３ 水牛 ＣＡＲＴ 基因同源性及系统进化树分析 ＮＣＢＩ 序列相似性分析 （ ｈｔｔｐｓ： ／ ／ ｂｌａｓｔ． ｎｃｂｉ． ｎｌｍ． ｎｉｈ．ｇｏｖ ／ Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉ）对所得水牛序列与 ＧｅｎＢａｎｋ 中与美 洲野牛、 野牦牛、 普通牛、 羊、 双峰驼与单峰驼、 野 猪、 马和驴、 人类与猕猴基因序列进行比对分析， 使 用 Ｍｅｇａ ７􀆰 ０ 软件构建系统进化树， 参考序列及相似 性分析结果见表 ２。 所得水牛 ＣＡＲＴ 基因序列与美洲 野牛、 普通牛相似程度为 １００％， 与野牦牛、 羊相似 程度为 ９８％， 与双峰驼、 单峰驼相似程度为 ９１％， 与猕猴相似程度为 ９１％， 与马、 驴相似程度为 ８５％， 与人类、 野猪相似程度分别为 ８１％、 ７８％。 Ｍｅｇａ ７􀆰 ０ 分析结果见图 ５， 由图可知水牛与黄牛、 牦牛和美洲 野牛， 以及绵羊最早聚为一类， 同源性较高， 说明 ＣＡＲＴ 基因在多胃反刍动物中保守性较强。 单峰驼与 双峰驼、 野猪、 马与驴各聚为一类， 共 ３ 条分支， 与 牛羊共聚为一大分支， 人类与猕猴聚为一类， 为另一 大分支。 聚类分析可见马与驴分化最早， 最晚为单峰 驼与双峰驼。 畜牧与兽医 ２０２０ 年 第 ５２ 卷 第 ２ 期 ·３·