物理方法)(化学方法 生物方法 珠心培养 愈伤脱毒 处理脱毒)(茎尖培养)(极体嫁少 技术依据:(1)植物病毒本身不具有主动转移能力。在一个植物体内,病毒易于通过维 管系统而移动,但在分生组织中不存在维管系统。病毒在细胞间移动只 能通过胞间连丝,速度很慢,很难赶上活跃生长的茎尖 (2)在旺盛分裂的分生细胞中,代谢活性高,竞争抑制了病毒的复制 (3)在植物体内,可能存在着病毒钝化系统,它在分生组织中比其他任何 区域都具有更高的活性; (4)在茎尖存在高水平内源生长素,也可能抑制病毒的增值。 具体操作:外植体经表面消毒灭菌后,在解剖镜下,经无菌操作切取小茎尖,接种到备 用培养基上,放入培养室内进行培养 1.剥取茎尖的方法 1.1工具:解剖镜(实体显微镜),解剖针,解剖刀。为防止茎尖变干,要在衬有 无菌湿滤纸的培养皿内进行解剖。 1.2茎尖外植体要用75%酒精浸蘸一下或0.1%的次氯酸钠消毒10分钟 2.茎尖脱毒的方法 2.1取样与消毒: 可直接在选定的植株上取顶芽进行消毒接种,也可采侧芽消毒接种。消毒方法是:剪取 顶芽梢段3-5cm,剥去大叶片,用自来水冲洗干净,在75%酒精种浸泡30秒左右,用1%-3% 次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分种,最后用无菌水冲洗材料4-5次。 酒精擦拭手 外植体消毒 浸泡5min 器械消毒 酒精灯灼烧 酒精擦拭培养皿技术依据：（1）植物病毒本身不具有主动转移能力。在一个植物体内，病毒易于通过维 管系统而移动，但在分生组织中不存在维管系统。病毒在细胞间移动只 能通过胞间连丝，速度很慢，很难赶上活跃生长的茎尖； （2）在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性高，竞争抑制了病毒的复制； （3）在植物体内，可能存在着病毒钝化系统，它在分生组织中比其他任何 区域都具有更高的活性； （4）在茎尖存在高水平内源生长素，也可能抑制病毒的增值。 具体操作：外植体经表面消毒灭菌后，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备 用培养基上，放入培养室内进行培养。 1. 剥取茎尖的方法 1.1 工具：解剖镜（实体显微镜），解剖针，解剖刀。为防止茎尖变干，要在衬有 无菌湿滤纸的培养皿内进行解剖。 1.2 茎尖外植体要用 75%酒精浸蘸一下或 0.1%的次氯酸钠消毒 10 分钟。 2. 茎尖脱毒的方法 2.1 取样与消毒： 可直接在选定的植株上取顶芽进行消毒接种，也可采侧芽消毒接种。消毒方法是：剪取 顶芽梢段 3-5cm，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在 75%酒精种浸泡 30 秒左右，用 1%-3% 次氯酸钠或 5%-7%的漂白粉溶液消毒 10-20 分种，最后用无菌水冲洗材料 4-5 次