3.亲和层析 亲和层析(affinity chromatography)分离技术是根据许多蛋白质对特定的化学基团具 有专一性结合的原理。这些能被生物大分子如蛋白质所识别并与之结合的基团称为配基 或配体 亲和层析是 种极有效的分离纯化蛋白质的方法。例如酶对它的底钱 具有特殊的亲和力：抗原和抗体互为配基。以伴刀豆球蛋白A(concanavalin A)的分肉 纯化为例，由于该蛋白对葡萄糖有专一性亲和吸附，因此可把葡萄糖通过适当的化学反 应共价地连接到像琼脂糖凝胶一类的载体表面上。为了防止载体表面的空间位阻影响待 分离的蛋白质大分子与其配基的结合，在园基和载体之间往往插入一段所智的连接暗（或 称为间隔臂，spacer arm),使配体与载体之间保持足够的距离。如下所示 G 载体 配基 连接臂 格这种多被颗粒装入一定规格的玻璃管中就制成了一根亲和层析柱。当含有伴刀豆 球蛋白的提取液加到层析柱的上部，并沿柱向下流过时，待纯化的蛋白质与其特异性配 基结合而被吸附到柱上，其他蛋白因 能与葡萄糖配基结合将通过柱子而流出（图 2-28)。然后采用一定的洗脱条件，如浓的葡萄糖溶液进行洗脱，即可把该蛋白质洗脱下 来，达到与其它蛋白质分离的目的（图2-28b)。 丰专件结合的活白质 洗脱体积 图2-28亲和层析示意图 6060 3. 亲和层析 亲和层析（affinity chromatography）分离技术是根据许多蛋白质对特定的化学基团具 有专一性结合的原理。这些能被生物大分子如蛋白质所识别并与之结合的基团称为配基 或配体（ligand）。亲和层析是一种极有效的分离纯化蛋白质的方法。例如酶对它的底物 具有特殊的亲和力；抗原和抗体互为配基。以伴刀豆球蛋白 A（concanavalin A）的分离 纯化为例，由于该蛋白对葡萄糖有专一性亲和吸附，因此可把葡萄糖通过适当的化学反 应共价地连接到像琼脂糖凝胶一类的载体表面上。为了防止载体表面的空间位阻影响待 分离的蛋白质大分子与其配基的结合，在配基和载体之间往往插入一段所谓的连接臂（或 称为间隔臂，spacer arm），使配体与载体之间保持足够的距离。如下所示： Ä G 载体 配基 连接臂 将这种多糖颗粒装入一定规格的玻璃管中就制成了一根亲和层析柱。当含有伴刀豆 球蛋白的提取液加到层析柱的上部，并沿柱向下流过时，待纯化的蛋白质与其特异性配 基结合而被吸附到柱上，其他蛋白因不能与葡萄糖配基结合将通过柱子而流出（图 2-28a）。然后采用一定的洗脱条件，如浓的葡萄糖溶液进行洗脱，即可把该蛋白质洗脱下 来，达到与其它蛋白质分离的目的（图 2-28b）。 图 2-28 亲和层析示意图