匀，临用前混合置于一平皿内，放在培养基上层，然后将盖盖严，用凡士林密封，置37℃恒 温箱中培养。 （三)二氧化碳培养法少数细菌如布氏菌 (牛型)，在 含有10%二氧化碳环境下生长良好。若没有二氧 Ω 化碳培养箱， 可采用一直应用的烛缸法（图实5-3）：将接种的 培养基置玻 璃干燥器或其他可以密闭的玻璃缸内，于其内点 燃一小段蜡 烛，加上盖（盖边涂上凡士林以防漏气），约1mm 左右蜡烛熄 灭，此时缸内氧气己被消耗，缸内所含二氧化碳 约10%注意 蜡烛勿太长，而且不宜靠近缸壁，以免因局部玻 图实53二氧化碳培养法 璃过热而破 裂。 自患病动物病料中分离病原菌方法 所需器材：酒精灯、酒精棉、刀、剪、镊等，要求无菌操作。 1琼脂斜面分离法取琼脂斜面3管，用接种环蘸取欲检病料少许（如为脏器，先将表 面烧烙后，用灭菌解剖刀切开，以灭菌接种环由切口插入、转动、钓取组织)，混合于第1管 的凝集水中，再作斜面划线：然后抽出接种环，不经烧灼，继续在第2管、第3管斜面上作 同样划线。划毕，置37℃温箱中培养。经此法分离培养后，第2管的菌落较第1管为少，第 3管的菌落更少，如此较易得到单个菌落，达到纯粹培养之目的。 2琼脂平板涂布分离法被检病料如血液、腹水等，可用灭菌毛细吸管或吸管吸取，置 1-2滴于平板中央，用灭菌的L形玻棒作均匀涂布。如估计细菌数很多，可直接用火焰灭菌 的铂金耳钓菌，并做分区划线。如为脏器病料，可先作成乳剂再行涂布；或取其一小块，用 赁子夹住，表面烧烙后，用灭菌刀切开，以其切面直接进行涂布，此法适用于含菌量较少的 病料的分离。 3.营养肉汤分离法当组织病料中含病原菌少，或有抗菌药残留时，用上述琼脂斜面或 平板分离法可能无菌落长出，这时可以无菌操作剪取一小粒病料直接投人肉汤，经37℃培养， 在肉汤中长出细菌后，再用琼脂斜面或琼脂平板分离。 4试验动物分离法被检病料中疑有某种病原菌存在，可将病料以无菌操作取出，放入 灭菌乳钵或组织匀浆器内，加3-5倍量无菌生理盐水制成混悬液，吸取一定量注射（肌肉、 腹腔、皮下或静脉)入易感实验动物，待实验动物死后，取其脏器，常可分离到纯的病原菌。 例如，疑有猪丹毒杆菌存在的病料，可注射于鸽体，鸽死后，再取其脾脏以分离猪丹毒杆菌， 常可得到纯培养。 钓菌纯培养 被检材料经分离培养后，选择一个可疑菌落，用灭菌接种环（针）钓取少许，接种在新 11 匀，临用前混合置于一平皿内，放在培养基上层，然后将盖盖严，用凡士林密封，置 37℃恒 温箱中培养。 （三）二氧化碳培养法 少数细菌如布氏菌 （牛型），在 含有 10%二氧化碳环境下生长良好。若没有二氧 化碳培养箱， 可采用一直应用的烛缸法（图实 5-3）：将接种的 培养基 置玻 璃干燥器或其他可以密闭的玻璃缸内，于其内点 燃一小 段蜡 烛，加上盖（盖边涂上凡士林以防漏气），约 l min 左右蜡 烛熄 灭，此时缸内氧气已被消耗，缸内所含二氧化碳 约 10%。注意 蜡烛勿太长，而且不宜靠近缸壁，以免因局部玻 璃过热 而破 裂。 自患病动物病料中分离病原菌方法 所需器材：酒精灯、酒精棉、刀、剪、镊等，要求无菌操作。 1.琼脂斜面分离法 取琼脂斜面 3 管，用接种环蘸取欲检病料少许（如为脏器，先将表 面烧烙后，用灭菌解剖刀切开，以灭菌接种环由切口插入、转动、钓取组织），混合于第 1 管 的凝集水中，再作斜面划线；然后抽出接种环，不经烧灼，继续在第 2 管、第 3 管斜面上作 同样划线。划毕，置 37℃温箱中培养。经此法分离培养后，第 2 管的菌落较第 1 管为少，第 3 管的菌落更少，如此较易得到单个菌落，达到纯粹培养之目的。 2.琼脂平板涂布分离法 被检病料如血液、腹水等，可用灭菌毛细吸管或吸管吸取，置 1-2 滴于平板中央，用灭菌的 L 形玻棒作均匀涂布。如估计细菌数很多，可直接用火焰灭菌 的铂金耳钓菌，并做分区划线。如为脏器病料，可先作成乳剂再行涂布；或取其一小块，用 镊子夹住，表面烧烙后，用灭菌刀切开，以其切面直接进行涂布，此法适用于含菌量较少的 病料的分离。 3.营养肉汤分离法 当组织病料中含病原菌少，或有抗菌药残留时，用上述琼脂斜面或 平板分离法可能无菌落长出，这时可以无菌操作剪取一小粒病料直接投人肉汤，经 37℃培养， 在肉汤中长出细菌后，再用琼脂斜面或琼脂平板分离。 4.试验动物分离法 被检病料中疑有某种病原菌存在，可将病料以无菌操作取出，放入 灭菌乳钵或组织匀浆器内，加 3-5 倍量无菌生理盐水制成混悬液，吸取一定量注射（肌肉、 腹腔、皮下或静脉）入易感实验动物，待实验动物死后，取其脏器，常可分离到纯的病原菌。 例如，疑有猪丹毒杆菌存在的病料，可注射于鸽体，鸽死后，再取其脾脏以分离猪丹毒杆菌， 常可得到纯培养。 钓菌纯培养 被检材料经分离培养后，选择一个可疑菌落，用灭菌接种环（针）钓取少许，接种在新