DNA可被扩增10。 RAPD(Randomly Amplified Polymorphic DNA)是一种建立在PCR技术基础上、可 对整个基因组进行选择性扩增的分子标记技术。它是以一个随机合成的10寡核苷酸为 引物，在未知序列的基因组DNA上，对部分DNA序列进行随机扩增，产生长度不同 的DNA产物，通过电泳分离和EB(溴化乙锭，剧毒药品)染色，显示出扩增的DNA 条带。一般来讲，只有当模板DNA链上不太长（≤200Obp)的区域内，存在2个与随 机引物反向互补（基本或完全互补）的序列，这一段DNA片段才能被扩增，其数量也 是以指数方式递增。RAPD与常规PCR的不同之处是：①所用的引物比较短，为随机 合成的10寡核苷酸单链：②扩增反应中只用一个引物，但实际起到两个引物的作用： ③扩增循环中所用的退火温度较低(35一40℃)，以利于多态性的检出。 由于DNA聚合酶(Tag酶)的聚合能力和琼脂糖凝胶的分辨能力的限制，RAPD片 段的最佳长度一般为400~2000bp。 3实验材料 通过实验一制备得到的质量合格、浓度准确的植物基因组DNA溶液 4主要仪器设备（下划线示必须设备）和实验用具 PCR扩增仪Pekin Elmer公司)，高速冷冻离心机(Beckman公司)，低温高速离心机 (Eppendorf公司)，DU-640紫外分光光度计(Beckman公司)，电泳系统BIO-RAD 公司，凝胶成象系统BIO-RAD公司)。移液枪，灭菌的PCR管、离心管、吸头等。 5主要试剂 灭菌的ddHO:I0×buffer缓冲液（不含MgCb):25 nM M.Clz溶液：dNTP(每种 2.5mM): 随机引物经准确定量后，取少量用ddH20稀释成5M溶液，-20℃下保存备用： 模板DNA经准确定量后，取少量用ddHO稀释成5gL溶液，4℃下保存备用： Tag酶液(3U/μL):TBE电泳缓冲液：载样缓冲液(6×或10×)： 琼脂糖(BIOWEST):EB染液。 8 DNA 可被扩增 106。 RAPD（Randomly Amplified Polymorphic DNA）是一种建立在 PCR 技术基础上、可 对整个基因组进行选择性扩增的分子标记技术。它是以一个随机合成的 10 寡核苷酸为 引物，在未知序列的基因组 DNA 上，对部分 DNA 序列进行随机扩增，产生长度不同 的 DNA 产物，通过电泳分离和 EB（溴化乙锭，剧毒药品）染色，显示出扩增的 DNA 条带。一般来讲，只有当模板 DNA 链上不太长（≤2000bp）的区域内，存在 2 个与随 机引物反向互补（基本或完全互补）的序列，这一段 DNA 片段才能被扩增，其数量也 是以指数方式递增。RAPD 与常规 PCR 的不同之处是：① 所用的引物比较短，为随机 合成的 10 寡核苷酸单链；② 扩增反应中只用一个引物，但实际起到两个引物的作用； ③ 扩增循环中所用的退火温度较低（35－40℃），以利于多态性的检出。 由于 DNA 聚合酶（Taq 酶）的聚合能力和琼脂糖凝胶的分辨能力的限制，RAPD 片 段的最佳长度一般为 400～2000bp。 3 实验材料 通过实验一制备得到的质量合格、浓度准确的植物基因组 DNA 溶液。 4 主要仪器设备（下划线示必须设备）和实验用具 PCR 扩增仪(Pekin Elmer 公司)，高速冷冻离心机(Beckman 公司)，低温高速离心机 （Eppendorf 公司），DU-640 紫外分光光度计(Beckman 公司)，电泳系统(BIO-RAD 公司)，凝胶成象系统(BIO-RAD 公司)。移液枪，灭菌的 PCR 管、离心管、吸头等。 5 主要试剂 灭菌的 ddH2O；10×buffer 缓冲液（不含 MgCl2）；25mM MgCl2 溶液；dNTP（每种 2.5mM）； 随机引物经准确定量后，取少量用 ddH2O 稀释成 5µM 溶液，-20℃下保存备用； 模板 DNA 经准确定量后，取少量用 ddH2O 稀释成 5ng/µL 溶液，4℃下保存备用； Taq 酶液（3U/μL）；TBE 电泳缓冲液；载样缓冲液（6×或 10×）； 琼脂糖（BIOWEST）；EB 染液