粉试验结果也是这样。 (四)超低温冷冻保存植物营养器官、组织及细胞 1.对材料的选择植物的基因型、组织和细胞的年龄、生理状态 等对超低温贮存效果影响巨大。不同材料要用不同保护剂。茎尖的分 生组织细胞液泡小，水分少，可以快速冷冻，而细胞含水量大的组织 则要慢速冷冻，否则效果不佳。 2.预处理月的是增加细胞分裂、分化的同步化，减少细胞内自 由水，增加细胞抗寒力等。如进行组织预培养、提高培养基渗透压、 减少培养物水分，细胞继代培养时选择有丝分裂的有利时期、低温锻 炼等 3.冷冻保护剂的使用二甲基亚砜(DMSO)、甘油、糖、糖醇类物 质、一些氨基酸、多肽聚乙二醇等都可以作为不同植物、不同材料的 冷冻保护剂。 4.降温冷冻材料经保护剂处理后，在0℃预处理30-40分钟后， 分四种途径冰冻：①快速冰冻。即预处理后直接投入液氨。②慢速冰 冻。通常成熟细胞具有大的液泡，含有大量的水，对大多数植物材料 来说，不适宜快速冰冻，而需要在保护剂存在情况下的慢速冰冻。以 每分钟0.1-10℃速度降温（以每分钟降温1-2℃最好），降到-100℃左 右即浸入液氮，这样可以使细胞内水分充分渗透到细胞外结冰。③两 步冰冻法。是慢冻与速冻相结合的方法。即第一步慢冻到0℃，再慢 冻（每分钟下降0.5-4℃）到预冻温度(-30℃-40℃)，使细胞得到保 护性脱水。第二步投入液氮。④逐级冰冻法。先制备不同等级温度的 冰浴装置（如-10℃、-15℃、-23℃、-35℃、-40℃），在保护剂保护 下的材料，在0℃预处理后逐步通过这些等级的温度（每级停留4-6 分钟)然后浸入液氨，对成熟细胞的组织效果更好一些。 5.解冻解冻过程中要防止细胞内次生结冻及解冻吸水过程中， 由于吸水速度过快而形成对细胞膜的破坏。解冻方法有快速解冻法， 即从液氮中取出的材料立即投入37-40℃水浴中解冻，以防再生结冰。 6