3.关于冷冻保护剂的使用，种子冷冻保护剂有二甲基亚砜 (DMSO)、甘油、PEG、脯氨酸等。保护剂的作用是增加材料的外渗压， 使细胞内水分渗出，防止细胞内结晶，降低冰点，促进“玻璃化”形 成，稳定细胞膜结构。冷冻保护剂使用量要得当，既能使材料内水分 渗出，又不能渗出过量以防降低生活力。所以在冷贮存植物组织时使 用较多，而在种子上使用较少，只在顾拗性种子的研究上应用较多。 (三)花粉的超低温贮存 花粉的超低温贮存有以下几个关键技术： 1.花粉生活力的测定选用生活力高的贮存材料。 2.冷冻保存前的预处理花粉材料冷冻致死的原因也是细胞内 水分结晶，导致细胞膜的破坏。新采集的花粉含水量高(40-60%)超低 温处理必然冻死。为了避免冷冻时的细胞内结晶，提高花粉成活率， 冷冻前必须干燥脱水。脱水方法有：①冷冻干燥。即将花粉冷冻到零 下进行真空除湿：②真空干燥。即不经冷冻直接进行真空除湿：③风 干脱水。即吹风2-3小时，自然干燥到要求的含水量范围。前两种方 法在冷冻与干燥过程中花粉不同程度的受损或部分死亡，且脱水时间 长，后者脱水时间短且安全。 脱水也并不是脱得越干越好，而是脱到既不形成冰晶又能保护其 生活力为宜，这个含水量叫水分下限。各种植物花粉的下限值是不同 的，桃和松的花粉水分下限值为1-2%，椰子花粉为2%，玉米花粉为 2-3%。 3.关于冷冻保护剂（有PEG、葡萄糖、DMS0、氯化钠等）的使用 一般不使用冷冻保护剂。不少研究证明，使用冷冻保护不如干燥到合 适水分，直接浸入液氮效果好。 4.冷冻和解冻速度许多研究者证明，花粉只要干燥到合适程 度，其冷冻或解冻速度并不重要，马铃薯花粉快速或慢速冷冻到-196 ℃，9个月后，成活率都很好。喜马拉雅杉花粉含水量低于20%，在 液氨中保存后，不控制解冻速度，成活都很好。其他用玉米、黑麦花