(2)磷酸盐缓冲液 ①成分：无菌磷酸二氢钾(KHPO4)34.0g,蒸馏水500mL,pH7.2。 ②制法 a.贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用1molL氢氧化钠溶液调 节pH7.2,用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。 b.稀释液：取贮存液1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL,分装于适宜容器中，121℃ 高压灭菌15min (3)无菌生理盐水 ①成分：氯化钠85g,蒸馏水1000mL。 2制法：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。 菌落总数的检验程序见图111。 稀释液，均质 10倍系列稀释 每皿中加入15~20ml平板计数琼脂培养基，混匀 36℃1℃，48h2h,培养 计数各平板菌落数 计算菌落总数 报告 图1-1-1荫落总数的检验程序 3.操作步骤 (1)样品的稀释及培养 ①固体和半固体样品：称取25g样品置盛有25mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均 质杯内，8000~10000 r/min均质1min~2min,或放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋 中，用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1：10的样品匀液。 ②液体样品：以无南吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无 菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。 ③用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9ml 稀释液的无菌试管 (注意吸管或吸头 端不 要触及稀释液面)，振据试管或换用1支无菌 吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。（2）磷酸盐缓冲液 ① 成分：无菌磷酸二氢钾（KH2PO4）34.0 g，蒸馏水 500 mL，pH 7.2。 ② 制法： a. 贮存液：称取34.0 g的磷酸二氢钾溶于500 mL蒸馏水中，用1 mol/L氢氧化钠溶液调 节pH7.2，用蒸馏水稀释至1 000 mL后贮存于冰箱。 b. 稀释液：取贮存液 1.25 mL，用蒸馏水稀释至 1 000 mL，分装于适宜容器中，121℃ 高压灭菌 15 min。 （3）无菌生理盐水 ①成分：氯化钠 8.5 g，蒸馏水 1 000 mL。 ②制法：称取 8.5ｇ氯化钠溶于 1 000 mL 蒸馏水中，121℃高压灭菌 15 min。 菌落总数的检验程序见图 1-1-1。 图 1-1-1 菌落总数的检验程序 3. 操作步骤 （1）样品的稀释及培养 ① 固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均 质杯内，8 000～10 000 r/min均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋 中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10的样品匀液。 ② 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无 菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 ③ 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌 吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。 选择 2～3个适宜稀释度的样品匀液，各 取 1 mL分别加入无菌培养皿内 每皿中加入 15～20 mL平板计数琼脂培养基，混匀 36℃±1℃，48h±2h，培养 计数各平板菌落数 计算菌落总数 报告 检 样 25 g(mL)样品+225 mL 稀释液，均质 10 倍系列稀释