④另取1mL无菌吸管或微量移液器，按上条操作方法，做10倍系列稀释液。每递增 稀释一次，换用1次1L无菌吸管或吸头。 ⑤根据对样品污染状况的估计，选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包 括原液)，在进行10倍递增稀释时， 吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个 平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 ®稀释液移入平皿后，及时将15mL~20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可 放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)领注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 ⑦待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48ht2h。水产品30℃±1℃培养 72ht3h。如果样品中 可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时 可在凝固后的琼脂表 面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL),凝固后翻转平板，进行培养 (2)菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应 的菌落数量。 ①洗取菌落数在30CFU一300CF之间、无莓征菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30C℉U的平板记录具体菌落数，大于300C℉U的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数 应采用两个平板的平均数 ②其中 个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板 作为该稀释度的菌落数：若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀， 即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 ③当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 (3)结果与报生 ①菌落总数的计算方法 a.若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均 值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g(mL)样品中菌落总数结果（表1-1-2中例 b.若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式(1-1-1)计算 N= (1-1-1) (n +0.In,d 式中： 一样品中南落数 EC- 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和 稀释度（低稀释倍数）平板个数： 第二稀释度（高稀释倍数）平板个数： d一稀释因子（第一稀释度）。 表111两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时的示例 稀释度 1:100(第一稀释度) 1:1000(第二稀释度) 菌落数(CFU) 232,244 33,35 232+244+33+35 = 544 =24727 2+0.1×2102 0.022 上述数据修约后，表示为25000或2.5×10。 c.若所有稀释度的平板上茵落数均大于300C℉U,则对稀释度最高的平板进行计数， 其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算（表1-12中例 2)。 ④ 另取1 mL无菌吸管或微量移液器，按上条操作方法，做10倍系列稀释液。每递增 稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。 ⑤ 根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包 括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个 平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 ⑥ 稀释液移入平皿后，及时将15 mL～20 mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可 放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 ⑦ 待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养 48h±2 h。水产品 30℃±1℃培养 72h±3 h。如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表 面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转平板，进行培养。 （2）菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应 的菌落数量。 ① 选取菌落数在30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数 应采用两个平板的平均数。 ② 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板 作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀， 即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 ③ 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 （3）结果与报告 ① 菌落总数的计算方法 a. 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均 值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果（表1-1-2中例 1）。 b. 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（1-1-1）计算： n n d C N 1 2  0.1   （1-1-1） 式中：N——样品中菌落数； ∑C——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数； n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数； d——稀释因子（第一稀释度）。 表 1-1-1 两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时的示例 稀释度 1:100（第一稀释度） 1:1000（第二稀释度） 菌落数（CFU） 232，244 33，35 上述数据修约后，表示为 25 000 或 2.5×104。 c. 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数， 其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算（表1-1-2中例 2）。 N= 232+244+33+35 [2+(0.1×2)]10-2 = 544 0.022 =24727