3.1.1VSV△MT病毒的RT-PCR鉴定 通过病毒挽救技术得到VSV△MT病毒后，将病毒用冻存管收集起来。然后进行基因组 RNA抽提，再进行逆转录，将逆转录出来的cDNA用针对VSV△MT病毒的M蛋白基因序列设 计的引物进行PCR,PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，如图2所示在100Obp左右处有条带，分 子量与预期大小一致，即包括了M基因和部分P基因。再将PCR产物进行测序，如图所示， 第51为氨基酸发生缺失和第221位氨基酸及226位氨基酸发生突变（分别由缬氨酸突变为 苯丙氨酸和丝氨酸突变为精氨酸)。 7kbp 4kbp 2kbp 1kbD 750bp_ 500bp。 250bp 图3.VSV△MT病毒M基因PCR扩增产物琼脂糖电泳1.DNA Marker:2.扩增VSVM基因 Fig 3.Electrophoresis of PCR product of VSVAMT M Lanel.DNA Marker:Lane2.VSV Mgene product ATGAGTTCCTTAAAGAAGATTCTCGGTCTGAAGGGGAAAGGTAAGAAATCTAAGAAATTAGGGATCGCACCACCCCCTTATGAAGAGGACACTAGCATGG 古g十6中古6。书，中 AGTATGCTCCGAGCGCICCAATTGACAAATCCTATTTTGGAGTTGACGAGGACACCFATGATCCGAATCAATTAAGATATGAGAAATTCITCITTACAGT GACGAGATGGACAC E￥A P S A P1 D K S Y F G V +十+十十++ GAAAATGACGOTTAGATCTAATCGTCCGTZCAGAACATACTCAGATGTGGCAGCCGCTGTATCCCATTGGGATCACATGTACATCGGAATGGCAGGGAAA COTCCCTTCTACAAAATCTTGGCTTTITTGGGTTCTTCTAATCTAAAGGCCACTCCAGCQOTATTGGCAGATCAAGGTCAACCAGAOTATCACGCTCACT 图4.VSV△MT病毒M蛋白基因RT-PCR产物测序结果 Fig 4.sequencing result of product of RT-PCR of VSVAMT M 3.1.2VSV△MT病毒的western-blotting鉴定 经RT-PCR鉴定正确后，纯化后的病毒经超速离心浓缩后，将病毒制蛋白样，以感染VSV 的猪血清作为一抗按文献所述方法a进行western--blotting鉴定。如图所示，第一泳道和3.1.1 VSVΔMT 病毒的 RT-PCR 鉴定 通过病毒挽救技术得到 VSVΔMT 病毒后，将病毒用冻存管收集起来。然后进行基因组 RNA 抽提，再进行逆转录，将逆转录出来的 cDNA 用针对 VSVΔMT 病毒的 M 蛋白基因序列设 计的引物进行 PCR,PCR 产物进行琼脂糖凝胶电泳，如图 2 所示在 1000bp 左右处有条带，分 子量与预期大小一致，即包括了 M 基因和部分 P 基因。再将 PCR 产物进行测序，如图所示， 第 51 为氨基酸发生缺失和第 221 位氨基酸及 226 位氨基酸发生突变（分别由缬氨酸突变为 苯丙氨酸和丝氨酸突变为精氨酸）。 图 3. VSVΔMT 病毒 M 基因 PCR 扩增产物琼脂糖电泳 1.DNA Marker；2.扩增 VSV M 基因 Fig 3. Electrophoresis of PCR product of VSVΔMT M Lane1. DNA Marker；Lane2. VSV M gene product 图 4. VSVΔMT 病毒 M 蛋白基因 RT-PCR 产物测序结果. Fig 4. sequencing result of product of RT-PCR of VSVΔMT M 3.1.2 VSVΔMT 病毒的 western-blotting 鉴定 经 RT-PCR 鉴定正确后，纯化后的病毒经超速离心浓缩后，将病毒制蛋白样，以感染 VSV 的猪血清作为一抗按文献所述方法 [13]进行 western-blotting 鉴定。如图所示，第一泳道和