(二)组胺的测定(GB/T5009.45一2003) 1,原理鱼体中组胺用正戊醇提取，遇偶氮试剂显橙色，与标准系列比较定量 2.材料 (1)正戊醇。 (2)三氯乙酸溶液(100gL）。 (3)碳酸钠溶液(50gL)。 (4)氢氧化钠溶液(250gL)。 (5)盐酸(1+11 (6)组胺标准储备液：准确称取0.2767g于100℃±5℃干燥2h的磷酸组胺溶于水， 移入100mL容量瓶中，再加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1.0mg组胺。 (7)磷酸组胺标准使用液：吸取1.0mL组胺标准溶液，置于50mL容量瓶中，加水 稀释至刻度。此溶液每毫升相当于20.0g组胺。 (8)偶每试剂 ①甲液：称取0.5g对硝基苯胺，加5mL盐酸溶液溶解后，再加水稀释至200mL 置冰箱中。 ②乙液：亚硝酸钠(5/L),临用现配 吸取甲液5mL、乙液40mL混合后立即使用， 3.实哈先蹬 (1)试样处理：称取500g~1000g纹碎并混和均匀的试样，置于具塞锥形瓶中，加 入15mL~20mL 三氯乙酸溶液(100gL),浸泡2h~3h,过滤。吸取称2.0mL滤液，置 于分液漏斗中，加氢氧化钠溶液(250gL)使呈碱性，每次加入3mL正戊醇，振摇5 mi,提取3次，合并正戊醇并稀释至10.0mlL吸取2.0mL正戊醇提取液于分液漏斗中， 每次加3mL盐移1+11)振摇提取3次，合并盐酸提取液并稀释至10.0mL,备用。 (2)测定：吸取2.0mL盐酸提取液于10mL比色管中， 另吸取0mL、0.20mL 040mL、0.60mL、0.80ml 、10mL组胺标准使用液（相当于0g、40g、80g、12.0 μg、16.04g、20.0μg组胺)，分别置于10mL比色管中，加水至1mL,再各加1mL盐 酸(1+11)。试样与标准管各加3mL碳酸钠溶液(50gL),3mL偶氮试剂，加水至刻 度，混匀，放置10min后用1cm比色杯以零管调节零点，于480nm波长处测吸光度，绘 制标准曲线比较，或与标准系列目测比较。 4.计算和 结果判定 试样中组胺的含量按式(9-21)进行计算。 2x2/h×2/10×2/10×100×10. (9-2-1) 式中：X一试样中组胺的含量，单位为毫克每百克(mg100g): V一加入三氯乙酸溶液(100gL)的体积，单位为毫升(mL): 测定时试样中组胺的质量，单位为微克（μg) 试样质量，单位为克(g)。 计算结果表示到小数点后一位。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值 不得超过算术平均值的10%。 (三)pH测定（酸度计法） 活用干蛎（蚝、海垢子） 1.原理用酸度计直接测定试样水溶液pH 2.设备酸度计（精度在0.050以上）。 3.实验步骤称取10.00g纹碎试样，加新煮沸后冷却的水至100mL,摇匀，浸渍30 min后过滤或离心，取约50mL滤液于100mL烧杯中，用酸度计测定pH。（二）组胺的测定（GB/T 5009.45—2003） 1. 原理 鱼体中组胺用正戊醇提取，遇偶氮试剂显橙色，与标准系列比较定量。 2. 材料 （1）正戊醇。 （2）三氯乙酸溶液（100 g/L）。 （3）碳酸钠溶液（50 g/L）。 （4）氢氧化钠溶液（250 g/L）。 （5）盐酸（1+11）。 （6）组胺标准储备液：准确称取 0.2767 g 于 100℃±5℃干燥 2 h 的磷酸组胺溶于水， 移入 100 mL 容量瓶中，再加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于 1.0 mg 组胺。 （7）磷酸组胺标准使用液：吸取 1.0 mL 组胺标准溶液，置于 50 mL 容量瓶中，加水 稀释至刻度。此溶液每毫升相当于 20.0 µg 组胺。 （8）偶氮试剂 ① 甲液：称取 0.5 g 対硝基苯胺，加 5 mL 盐酸溶液溶解后，再加水稀释至 200 mL， 置冰箱中。 ② 乙液：亚硝酸钠（5 g/L），临用现配。 吸取甲液 5 mL、乙液 40 mL 混合后立即使用。 3. 实验步骤 （1）试样处理：称取 5.00 g～10.00 g 绞碎并混和均匀的试样，置于具塞锥形瓶中，加 入 15 mL～20 mL 三氯乙酸溶液(100 g/L)，浸泡 2 h～3 h，过滤。吸取称 2.0 mL 滤液，置 于分液漏斗中，加氢氧化钠溶液（250 g/L） 使呈碱性，每次加入 3 mL 正戊醇，振摇 5 min，提取 3 次，合并正戊醇并稀释至 10.0 mL 吸取 2.0 mL 正戊醇提取液于分液漏斗中， 每次加 3 mL 盐酸(1+11)振摇提取 3 次，合并盐酸提取液并稀释至 10.0 mL，备用。 （2）测定：吸取 2.0 mL 盐酸提取液于 10 mL 比色管中，另吸取 0 mL、0.20 mL、 0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.0 mL 组胺标准使用液（相当于 0 µg、4.0 µg、8.0 µg、12.0 µg、16.0 µg 、20.0 µg 组胺），分别置于 10 mL 比色管中，加水至 1 mL，再各加 1 mL 盐 酸（1+11）。试样与标准管各加 3 mL 碳酸钠溶液（50 g/L），3 mL 偶氮试剂，加水至刻 度，混匀，放置 10 min 后用 1 cm 比色杯以零管调节零点，于 480 nm 波长处测吸光度，绘 制标准曲线比较，或与标准系列目测比较。 4. 计算和结果判定 试样中组胺的含量按式（9-2-1）进行计算。 X＝ 100 2 2 / 1 2 / 10 2 / 10 1000 1  m  V    m ……………………（9-2-1） 式中：X——试样中组胺的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）； V1——加入三氯乙酸溶液（100g/L）的体积，单位为毫升（mL）； m1——测定时试样中组胺的质量，单位为微克（µg）； m2——试样质量，单位为克（g）。 计算结果表示到小数点后一位。 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值 不得超过算术平均值的 10%。 （三）pH 测定（酸度计法） 适用于牡蛎（蚝、海蛎子）。 1. 原理 用酸度计直接测定试样水溶液 pH。 2. 设备 酸度计（精度在 0.050 以上）。 3. 实验步骤 称取 10.00 g 绞碎试样，加新煮沸后冷却的水至 100 mL，摇匀，浸渍 30 min 后过滤或离心，取约 50 mL 滤液于 100 mL 烧杯中，用酸度计测定 pH