第四章单克隆杭体 及ImmoVL丙酮酸钠)，不完全RPM-I640或DMEM培养基（不含血清） 2.HAT培养液 ()HAT100倍贮存液称取136.1mg的次黄嘌吟(H),1.9mg的氨基碟吟(A)和38.8mg 的胸腺嘧啶核苷(T),略偏碱，以促进溶解。贮存液过滤除菌，20℃冻存备用。现在实验 室一般都用商品化的现成贮存液 (2)HAT应用液每1O0ml完全培养基加入1ml上述HAT贮存液。 3.HT培养液 ()HT100倍贮存液称取136.mg次黄嘌岭(H)和38.8mg胸腺嘧啶核苷(T)溶于 100ml双蒸水，过滤除菌，-20C冻存备用。现在实验室一般都用商品化的现成贮存液。 (2)HT应用液每100ml完全培养基中加入Iml上述HT贮存液。 4.50%PEG溶液 在玻璃瓶中高压10g分子量为4000的PEG(15si15分钟)，使之溶化为液体，冷却， 在其凝固之前（约55℃）加入10ml不完全DMEM培养液（可以供20次融合使用，可以在 室温存几个月之久)。 注：不能用含有蛋白的培养基配制PEG溶液。浓度低于30%的PEG融合成功率低：高 于50%的PEG对细胞毒性大。 (仁)骨髓瘤细胞的准备 1,骨髓瘤细胞的选择 目前可供应用的骨萄南系来自小鼠、大鼠和人等。由于对骨髓瘤的诱发过程高度敏感的 只有BALB和N2B品系小鼠，所以来自两种品系的骨髓瘤细胞较多，人类尚无广泛成熟 应用的细胞系。下表为几种可选用的鼠骨髓指细胞系（表41）。 表41几种常用的鼠骨随瘤细胞系 细胞系 物种（品系） 特性 P3-X63-Ag8 小鼠BALB/c 分泌gG,现在很少应用 P3-NS1/1-Ag4-1 小鼠BALB/e 合成轻链，HAT选择 P3-X63-Ag8.653 小鼠BALB/C 不合成Ig,较广泛应用，HAT选择 SP2/0-Ag14 小鼠BALB/c 不合成Ig,广泛应用，HAT选择 小鼠BALB/C 不合成g,HAT选择 S194/5 XXO BU 1 小鼠BALB/ 不合成Ig,HAT选择 210-CRY3-Agl 大鼠Lou/c 分泌K轻链，HAT选择 YB2/3Ag20 大鼠Louc 不合成Ig,HAT选择 IK983F 大鼠Lou/C 不合成Ig,HAT选择 由于在细胞融合过程中，骨髓瘤细胞与脾细胞的轻重链可能会随机地相互结合。为了避 -57 第四章 单克隆抗体 - 57 - 及 1mmol/L 丙酮酸钠），不完全 RPMI-1640 或 DMEM 培养基（不含血清）。 2．HAT 培养液 (1) HAT 100 倍贮存液 称取 136.1mg 的次黄嘌呤（H），1.9mg 的氨基碟呤（A）和 38.8mg 的胸腺嘧啶核苷（T），略偏碱，以促进溶解。贮存液过滤除菌，-20℃冻存备用。现在实验 室一般都用商品化的现成贮存液。 (2) HAT 应用液 每 100ml 完全培养基加入 1 ml 上述 HAT 贮存液。 3．HT 培养液 (1) HT 100 倍贮存液 称取 136.mg 次黄嘌呤（H）和 38.8mg 胸腺嘧啶核苷（T）溶于 100ml 双蒸水，过滤除菌，-20℃冻存备用。现在实验室一般都用商品化的现成贮存液。 (2) HT 应用液 每 100ml 完全培养基中加入 l ml 上述 HT 贮存液。 4．50%PEG 溶液 在玻璃瓶中高压 10g 分子量为 4000 的 PEG（15psi/15 分钟），使之溶化为液体，冷却， 在其凝固之前（约 55℃）加入 10ml 不完全 DMEM 培养液(可以供 20 次融合使用，可以在 室温存几个月之久)。 注：不能用含有蛋白的培养基配制 PEG 溶液。浓度低于 30％的 PEG 融合成功率低；高 于 50%的 PEG 对细胞毒性大。 (二) 骨髓瘤细胞的准备 1． 骨髓瘤细胞的选择 目前可供应用的骨髓瘤系来自小鼠、大鼠和人等。由于对骨髓瘤的诱发过程高度敏感的 只有 BALB/c 和 N2B 品系小鼠，所以来自两种品系的骨髓瘤细胞较多，人类尚无广泛成熟 应用的细胞系。下表为几种可选用的鼠骨髓瘤细胞系（表 4-1）。 表 4-1 几种常用的鼠骨髓瘤细胞系 细 胞 系 物种（品系） 特 性 P3-X63-Ag8 小鼠 BALB/c 分泌 IgG，现在很少应用 P3-NS1/1-Ag4-1 小鼠 BALB/c 合成κ轻链，HAT 选择 P3-X63-Ag8.653 小鼠 BALB/c 不合成 Ig，较广泛应用，HAT 选择 SP2/0-Ag14 小鼠 BALB/c 不合成 Ig，广泛应用，HAT 选择 FO 小鼠 BALB/c 不合成 Ig，HAT 选择 S194/5 XXO.BU.1 小鼠 BALB/c 不合成 Ig，HAT 选择 210-CRY3-Ag1 大鼠 Lou/c 分泌κ轻链，HAT 选择 YB2/3Ag20 大鼠 Lou/c 不合成 Ig，HAT 选择 IK983F 大鼠 Lou/c 不合成 Ig，HAT 选择 由于在细胞融合过程中，骨髓瘤细胞与脾细胞的轻重链可能会随机地相互结合。为了避