安徽农业大学学报 2016年 腐熟及各类物质之间相互转化,提高堆肥肥效6。有机肥工场进行。采用条垛型有机肥发酵技术进行 本试验在测定4种微生物菌剂有效活菌数、纤发酵,堆垛下底宽2m,上底宽1m,堆高0.9 维素酶和蛋白酶活性的基础上,研究了4种微生物长度5m,堆垛底部设置30cm宽,20cm深的通风 菌剂对甘蔗渣有机肥发酵质量的影响,以期探讨适槽,甘蔗渣与牛粪按25:23:20:17:15比例分5 宜甘蔗渣有机肥发酵的最佳微生物菌剂。 层堆积,在每层甘蔗渣上按上述比例洒上尿素和微 1材料与方法 生物菌剂。各处理物料水分控制在70%左右。分别 于堆制后10、20、30和结束前20d(添加菜籽粉 1.1供试微生物菌剂 350kg)翻堆4次。 试验中采用的4种微生物菌剂均为固体菌剂, 试验共设5个处理:1号处理为空白对照,不 分别简称为菌剂A、菌剂B、菌剂C和菌剂D 添加任何有机物料腐熟剂;2号处理添加菌剂A:3 1.2培养基 号处理添加菌剂B:4号处理添加菌剂C:5号处理 PDA培养基:去皮马铃薯200g,琼脂15g,添加菌剂D。具体试验设计方案参见表1 葡萄糖20g,水1000mnL 14取样方法 NA培养基:牛肉膏30g,NaCl50g,蛋白在第4次翻堆时取堆肥样品用于检测堆肥样品 胨100g,琼脂15-20g,水1000mL,pH72-75。的养分、腐殖酸含量、微生物数量等。取样时从堆 马丁氏(Mri)培养基:葡萄糖100g,磷垛前中后(按条垛长度从中间和距两端1/4处垂直挖 酸二氢钾(KHPO4)10g,硫酸镁(MgSO47H2O)开剖面)和上中下(按条垛高度从中间和距上下端 0.5g,蛋白胨50g,1%孟加拉红水溶液33mL,1/4处水平位置各取样05kg)取样拌匀后,用四分 琼脂15~20g,蒸馏水1000mL,氯霉素 法取样2份,每份0.5kg 13试验设计 .5供试菌剂有效活菌数测定 试验于2014年3月至5月在贵州省兴义市敬南 采用稀释分离法,具体步骤参见文献([8] 表1甘蔗渣有机肥试验设计方案 Table 1 The experiment design of the sugarcane residue composting 甘蔗渣用量/k 牛粪用量/kg 菌剂用量/g Dosage of Treatment Dosage of sugarcane residue cow dung microbal agent L CK 2添加菌剂A Added with microbial agent A 3.添加菌剂B 1300 Added with microbial agent B 4添加菌剂C Added with microbial agent C 1300 5添加菌剂D Added with microbial agent D 900 1300 100 1.6纤维素酶和蛋白酶活性测定 1.8堆肥样品腐殖酸含量检测 纤维素酶酶活力测定参照文献[9-10],蛋白酶活 总腐殖酸采用碱性焦磷酸钠浸提-重铬酸钾容 性测定参照文献[l 量法;游离腐殖酸采用氢氧化钠浸提-重铬酸钾容量 1.7堆肥样品养分的测定 法:水溶性殖酸采用水浸提-重铬酸钾容量法。 堆肥样品中有机质测定采用重铬酸钾比色法12:1.9堆肥样品可培养微生物计数 全氮采用硫酸过氧化氢消解,蒸馏滴定法12;全磷 不同微生物菌剂处理的堆体中真菌总数、细菌 采用硫酸过氧化氢消解,钒钼黄比色法;全钾采总数和霉菌总数的测定采用稀释平板测数法,混 用硫酸-过氧化氢消解,火焰光度法;速效氮采用菌接种培养。细菌培养24h后计数,真菌、霉菌培 氯化钠浸提,锌-硫酸亚铁还原蒸馏法;铵态氮采用养7h后计数。以出现20~300个菌落数的稀释度 氯化钠浸提,扩散法;pH.用电位法测定 的平板为计数标准,统计有效活菌数962 安 徽 农 业 大 学 学 报 2016 年 腐熟及各类物质之间相互转化，提高堆肥肥效[4-6]。 本试验在测定 4 种微生物菌剂有效活菌数、纤 维素酶和蛋白酶活性的基础上，研究了 4 种微生物 菌剂对甘蔗渣有机肥发酵质量的影响，以期探讨适 宜甘蔗渣有机肥发酵的最佳微生物菌剂。 1 材料与方法 1.1 供试微生物菌剂 试验中采用的 4 种微生物菌剂均为固体菌剂， 分别简称为菌剂 A、菌剂 B、菌剂 C 和菌剂 D。 1.2 培养基 PDA 培养基[7]：去皮马铃薯 200 g，琼脂 15 g， 葡萄糖 20 g，水 1000 mL。 NA 培养基[7]：牛肉膏 3.0 g，NaCl 5.0 g，蛋白 胨 10.0 g，琼脂 15~20 g，水 1000 mL，pH 7.2~7.5。 马丁氏（Martin）培养基[7]：葡萄糖 10.0 g，磷 酸二氢钾（KH2PO4）1.0 g，硫酸镁（MgSO4 . 7H2O） 0.5 g，蛋白胨 5.0 g，1%孟加拉红水溶液 3.3 mL， 琼脂 15～20 g，蒸馏水 1000 mL，氯霉素。 1.3 试验设计 试验于 2014 年 3 月至 5 月在贵州省兴义市敬南 有机肥工场进行。采用条垛型有机肥发酵技术进行 发酵，堆垛下底宽 2 m，上底宽 1 m，堆高 0.9 m， 长度 5 m，堆垛底部设置 30 cm 宽，20 cm 深的通风 槽，甘蔗渣与牛粪按 25∶23∶20∶17∶15 比例分 5 层堆积，在每层甘蔗渣上按上述比例洒上尿素和微 生物菌剂。各处理物料水分控制在 70%左右。分别 于堆制后 10、20、30 和结束前 20 d（添加菜籽粉 350 kg）翻堆 4 次。 试验共设 5 个处理：1 号处理为空白对照，不 添加任何有机物料腐熟剂；2 号处理添加菌剂 A；3 号处理添加菌剂 B；4 号处理添加菌剂 C；5 号处理 添加菌剂 D。具体试验设计方案参见表 1。 1.4 取样方法 在第 4 次翻堆时取堆肥样品用于检测堆肥样品 的养分、腐殖酸含量、微生物数量等。取样时从堆 垛前中后(按条垛长度从中间和距两端 1/4 处垂直挖 开剖面)和上中下（按条垛高度从中间和距上下端 1/4 处水平位置各取样 0.5 kg）取样拌匀后，用四分 法取样 2 份，每份 0.5 kg。 1.5 供试菌剂有效活菌数测定 采用稀释分离法，具体步骤参见文献[8]。 表 1 甘蔗渣有机肥试验设计方案 Table 1 The experiment design of the sugarcane residue composting 处理 Treatment 甘蔗渣用量/kg Dosage of sugarcane residue 牛粪用量/kg Dosage of cow dung 尿素用量/kg Dosage of urea 菌剂用量/g Dosage of microbal agent 1.CK 900 1300 12 0 2.添加菌剂 A Added with microbial agent A 900 1300 12 13200 3.添加菌剂 B Added with microbial agent B 900 1300 12 550 4.添加菌剂 C Added with microbial agent C 900 1300 12 220 5.添加菌剂 D Added with microbial agent D 900 1300 12 1100 1.6 纤维素酶和蛋白酶活性测定 纤维素酶酶活力测定参照文献[9-10]，蛋白酶活 性测定参照文献[11]。 1.7 堆肥样品养分的测定 堆肥样品中有机质测定采用重铬酸钾比色法[12]； 全氮采用硫酸-过氧化氢消解，蒸馏滴定法[12]；全磷 采用硫酸-过氧化氢消解，钒钼黄比色法[12]；全钾采 用硫酸-过氧化氢消解，火焰光度法[12]；速效氮采用 氯化钠浸提，锌-硫酸亚铁还原蒸馏法；铵态氮采用 氯化钠浸提，扩散法；pH 采用电位法测定。 1.8 堆肥样品腐殖酸含量检测 总腐殖酸采用碱性焦磷酸钠浸提-重铬酸钾容 量法；游离腐殖酸采用氢氧化钠浸提-重铬酸钾容量 法；水溶性殖酸采用水浸提-重铬酸钾容量法。 1.9 堆肥样品可培养微生物计数 不同微生物菌剂处理的堆体中真菌总数、细菌 总数和霉菌总数的测定采用稀释平板测数法[7]，混 菌接种培养。细菌培养 24 h 后计数，真菌、霉菌培 养 72 h 后计数。以出现 20～300 个菌落数的稀释度 的平板为计数标准，统计有效活菌数目