2000基因杂交信号放大仪( QIAGEN)内,20℃~学诊断结果为≥ ASC-US的受试者召回,进行阴道 25℃避光保持15min,设置程序,读取数值,相对光强镜检查。若阴道镜下有可见病变,则在病变处直接 度值等于或大于临界值时(即RLU/CO≥0)的样本取活检,若无可见病变,则取宫颈多点活检或ECC 判定为阳性,RIU/CO<10判定为阴性。HC2的检活检标本由中国医学科学院肿瘤医院病理学专家依 测阈值为5000拷贝/mL 据世界卫生组织(WHO)子宫颈肿瘤组织学诊断标 44 INNO-LIPA分型检测 准进行盲法诊断,诊断结果为正常、轻、中、重度宫颈 对 Iomega检测为HPV16和(或)HPV18阳性上皮内瘤变(CIN1、CIN2、CIN3)和宫颈癌 的标本以及其他 HR-HPV与HC2检测结果不一致6统计学分析 标本,采用 INNO-LIPA进行分型检测。采用离心柱 采用 Excel2016进行数据库管理,SPSS180 法提取宫颈脱落细胞DNA( QIAamp96DNA提取试软件进行统计学分析。计算总一致率,阳性一致率 剂盒,德国 QIAGEN公司);吸取10提取好的阴性一致率和 Kappa值用于评估两种检测方法的 DNA加入事先配好试剂的96孔PCR板孔中,每板致程度。计算灵敏度和特异度用于评估检测方法 PCR加入两个阳性对照(10HPV6型质粒)和两个用于宫颈癌前病变CIN2+有效性。两种检测之间 阴性性对照(10 uI DEPC水)。PCR程序设定为40个灵敏度或特异度的比较采用x2检验,检验水准 循环扩增(94℃30s,25℃52s,72℃45s)。将扩增a=0.05。 产物与固定在薄膜检测条带上的28种特异性寡核苷 酸探针杂交,通过洗液清除杂质,使用酶促反应使条 结果 带上结合扩增产物的区域显色。 INNO-LiPA检测完 成后,将所有条带黏贴到 INNO-LiPA扫描判读摸版1液基细胞学诊断结果 上,使用扫描仪进行条带分析。该技术可以检测28 2774例研究对象全部完成相关检测,结果纳 种HPV型别,包括HPV6、HPV1l、HPV16、HPV18、入统计学分析。细胞学诊断结果NILM2322例, HPV26、HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV40、ASC-US272例,AGC11例,ASC-H15例,LISL HPⅤ43、HPV44、HPV45、HPV51、HPV52、HPV53 115例,HISL37例,SCC2例。452例细胞学异常 HPV54、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68、(ASC-US及以上)的标本中两种检测方法检出 HPV69、HPV70、HPV71、HPV73、HPV74 HR-HPV均为211例,阳性率4668%,并且,随着 和HPV82。 细胞学分级的增加, Iomega和HC2两种检测方法 5阴道镜检查及活检 检出HR-HPV阳性率均有升高的趋势(P<Q001) 检测结果为HPV16/HPV18任意阳性或细胞(表1)。 表1HPⅤ检测结果与细胞学诊断的关系 Table 1 Relationship between HPV test results and cytological diagnosis Iomega LBC Total HR-HPV HPV16 HPV18 her HR-HPv NILM 297(1279) 20( 243(1047) 5(883) ASC-US 272(9.80) 76(27.94) AGC 11(040) 4(3636) 0(0 4(3636) 4(3636 ASC-H 10(6667) 2(1333) 4(26.67) 13(86.67) LISI 115(415) 87(75.76) 22(19.13) 4(348) 64(55.65 96(83.48) HISI 32(86 19(51.53) 4(10.81) 10(27.03) 2(0.02) 2(100.00) 0(0.00) 0(0.00) 2(10000) 2L.57 5.65 1328 P <0001 0.001 <0001 <0001 Total 2774 8(1831) 101(364) 33(L19 387(1395) 416(1500) 注:a. Iomega可检测的除HPV16/HPV18以外其他13种HPV型别;LBC,液基细胞学;()内为% Notes: a. Other 13 HPV genotypes except HPV16/HPV18 that Isomega can detect: LBC, liquidbased cytology :() 2HPⅤ检测结果比较 9272% Kappa=0.74(95%Cl=0.71~0.77),阳 Iomega和HC2检出HPV总的一致率为性的一致率为8678%,阴性的一致率为9377% 21994-2018ChinaAcademicJOurnalElectronicpUblishingHouse.Allrightsreservedhttp:/www.cnki.net２０００基 因 杂 交 信 号 放 大 仪 （ＱＩＡＧＥＮ）内，２０℃ ～ ２５℃避光保持１５ｍｉｎ，设置程序，读取数值，相对光强 度值等于或大于临界值时（即 ＲＬＵ／ＣＯ≥１．０）的样本 判定为阳性，ＲＬＵ／ＣＯ＜１．０判定为阴性。ＨＣ２的检 测阈值为５０００拷贝／ｍＬ。 ４．４ ＩＮＮＯ－ＬｉＰＡ分型检测 对Ｉｓｏｍｅｇａ检测为 ＨＰＶ１６和（或）ＨＰＶ１８阳 性 的标本以及其他 ＨＲ－ＨＰＶ 与 ＨＣ２检测结果不一致 标本，采用ＩＮＮＯ－ＬｉＰＡ进行分型检测。采用离心柱 法提取宫颈脱落细胞 ＤＮＡ（ＱＩＡａｍｐ９６ＤＮＡ 提取试 剂盒，德 国 ＱＩＡＧＥＮ 公 司）；吸 取 １０μｌ提 取 好 的 ＤＮＡ加入事先配好试剂的９６孔 ＰＣＲ 板孔中，每板 ＰＣＲ加入两个阳性对照（１０μｌＨＰＶ６型质粒）和两个 阴性性对照（１０μｌＤＥＰＣ水）。ＰＣＲ程序设定为４０个 循环扩增（９４℃ ３０ｓ，２５℃ ５２ｓ，７２℃ ４５ｓ）。将扩增 产物与固定在薄膜检测条带上的２８种特异性寡核苷 酸探针杂交，通过洗液清除杂质，使用酶促反应使条 带上结合扩增产物的区域显色。ＩＮＮＯ－ＬｉＰＡ 检测完 成后，将所有条带黏贴到ＩＮＮＯ－ＬｉＰＡ 扫描判读摸版 上，使用扫描仪进行条带分析。该技术可以检测２８ 种 ＨＰＶ 型别，包括 ＨＰＶ６、ＨＰＶ１１、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、 ＨＰＶ２６、ＨＰＶ３１、ＨＰＶ３３、ＨＰＶ３５、ＨＰＶ３９、ＨＰＶ４０、 ＨＰＶ４３、ＨＰＶ４４、ＨＰＶ４５、ＨＰＶ５１、ＨＰＶ５２、ＨＰＶ５３、 ＨＰＶ５４、ＨＰＶ５６、ＨＰＶ５８、ＨＰＶ５９、ＨＰＶ６６、ＨＰＶ６８、 ＨＰＶ６９、 ＨＰＶ７０、 ＨＰＶ７１、 ＨＰＶ７３、 ＨＰＶ７４ 和 ＨＰＶ８２。 ５ 阴道镜检查及活检 检测结果 为 ＨＰＶ１６／ＨＰＶ１８任意阳性或细胞 学诊断结果为≥ＡＳＣ－ＵＳ的 受 试 者 召 回，进 行 阴 道 镜检查。若阴道镜下有可见病变，则在病变处直接 取活检，若无可见病变，则取宫颈多点活检或 ＥＣＣ。 活检标本由中国医学科学院肿瘤医院病理学专家依 据世界卫生组织（ＷＨＯ）子宫颈肿瘤组织学诊断标 准进行盲法诊断，诊断结果为正常、轻、中、重度宫颈 上皮内瘤变（ＣＩＮ１、ＣＩＮ２、ＣＩＮ３）和宫颈癌。 ６ 统计学分析 采用 Ｅｘｃｅｌ２０１６ 进 行 数 据 库 管 理，ＳＰＳＳ１８．０ 软件进行统计学分析。计算总一致率，阳性一致率， 阴性一致率 和 Ｋａｐｐａ值用于评估两种检测方法的 一致程度。计算灵敏度和特异度用于评估检测方法 用于宫颈癌前病变 ＣＩＮ２＋有效性。两种检测之间 灵敏度或特异度 的比较采用 χ ２ 检 验，检 验 水 准 α＝０．０５。 结 果 １ 液基细胞学诊断结果 ２７７４例研 究 对 象 全 部 完 成 相 关 检 测，结 果 纳 入统计学分 析。细 胞 学 诊 断 结 果 ＮＩＬＭ ２３２２例， ＡＳＣ－ＵＳ２７２ 例，ＡＧＣ１１ 例，ＡＳＣ－Ｈ １５ 例，ＬＩＳＬ １１５例，ＨＩＳＬ３７例，ＳＣＣ２例。４５２例细 胞 学 异 常 （ＡＳＣ－ＵＳ 及 以 上）的标本中两种检 测方法检出 ＨＲ－ＨＰＶ 均为２１１例，阳性率４６．６８％，并且，随着 细胞学分级的增加，Ｉｓｏｍｅｇａ和 ＨＣ２两种检测方法 检出 ＨＲ－ＨＰＶ 阳性率均有升高的趋势（Ｐ＜０．００１） （表１）。 表１ ＨＰＶ检测结果与细胞学诊断的关系 Ｔａｂｌｅ１ ＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎＨＰＶｔｅｓｔｒｅｓｕｌｔｓａｎｄｃｙｔｏｌｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓ ＬＢＣ Ｔｏｔａｌ Ｉｓｏｍｅｇａ ＨＲ－ＨＰＶ ＨＰＶ１６ ＨＰＶ１８ ｏｔｈｅｒＨＲ－ＨＰＶａ ＨＣ２ ＮＩＬＭ ２３２２（８３．１７） ２９７（１２．７９） ４０（１．７２） ２０（０．８６） ２４３（１０．４７） ２０５（８．８３） ＡＳＣ－ＵＳ ２７２（９．８０） ７６（２７．９４） １１（４．０４） ３（１．１０） ６２（２２．７９） ６１（２２．４３） ＡＧＣ １１（０．４０） ４（３６．３６） ０（０．００） ０（０．００） ４（３６．３６） ４（３６．３６） ＡＳＣ－Ｈ １５（０．５４） １０（６６．６７） ７（４６．６７） ２（１３．３３） ４（２６．６７） １３（８６．６７） ＬＩＳＬ １１５（４．１５） ８７（７５．７６） ２２（１９．１３） ４（３．４８） ６４（５５．６５） ９６（８３．４８） ＨＩＳＬ ３７（１．３３） ３２（８６．４９） １９（５１．５３） ４（１０．８１） １０（２７．０３） ３５（９４．５９） ＳＣＣ ２（０．０２） ２（１００．００） ２（１００．００） ０（０．００） ０（０．００） ２（１００．００） Ｚ — ２１．５７ １８．８１ ５．６５ １３．２８ ２７．４０ Ｐ — ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１ ＜０．００１ Ｔｏｔａｌ ２７７４ ５０８（１８．３１） １０１（３．６４） ３３（１．１９） ３８７（１３．９５） ４１６（１５．００） 注：ａ．Ｉｓｏｍｅｇａ可检测的除 ＨＰＶ１６／ＨＰＶ１８以外其他１３种 ＨＰＶ 型别；ＬＢＣ，液基细胞学；（）内为％。 Ｎｏｔｅｓ：ａ．Ｏｔｈｅｒ１３ＨＰＶｇｅｎｏｔｙｐｅｓｅｘｃｅｐｔＨＰＶ１６／ＨＰＶ１８ｔｈａｔＩｓｏｍｅｇａｃａｎｄｅｔｅｃｔ；ＬＢＣ，ｌｉｑｕｉｄ－ｂａｓｅｄｃｙｔｏｌｏｇｙ；（）％． ２ ＨＰＶ检测结果比较 Ｉｓｏｍｅｇａ和 ＨＣ２ 检 出 ＨＰＶ 总 的 一 致 率 为 ９２．７２％，Ｋａｐｐａ＝０．７４（９５％ＣＩ＝０．７１～０．７７），阳 性的一致 率 为 ８６．７８％，阴性的一致率为 ９３．７７％ · ００５ · 病 毒 学 报 ３４卷