高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶 当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度 不同程度下降并先后析出,这种现象称 盐析,将大量盐加到蛋白质溶液中,高 浓度的盐离子可夺取蛋白质分子的水 化层,使蛋白质胶粒凝结并沉淀析出 盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效 果更好。由于各种蛋白质分子颗粒大 小、亲水程度不同,故盐析所需的盐浓 度也不一样,因此调节混合蛋白质溶液 中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段 沉淀。 2、等电点沉淀法 蛋白质在静电状态时颗粒之间的 静电斥力最小,因而溶解度也最小,各 种蛋白质的等电点有差别,可利用调节 溶液的pH达到某一蛋白质的等电点使 之沉淀,但此法很少单独使用,可与盐 析法结合用。 3、低温有机溶剂沉淀法 用与水可混溶的有机溶剂,甲醇 乙醇或丙酮,可使多数蛋白质溶解度降 低并析出,此法分辨力比盐析高,但蛋 白质较易变性,应在低温下进行。 根据蛋白质分子大小的差别,有 1、透析与超滤 透析法是利用半透膜将分子大小 不同的蛋白质分开。 超滤法是利用高压力或离心力,强 使水和其他小的溶质分子通过半透膜 而蛋白质留在膜上,可选择不同孔径的 滤膜截留不同分子量的蛋白质。 2、凝胶过滤法 也称分子排阻层析或分子筛层析, 这是根据分子大小分离蛋白质混合物 最有效的方法之一。柱中最常用的填充高，蛋白质的溶解度增加，此称盐溶； 当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度 不同程度下降并先后析出，这种现象称 盐析，将大量盐加到蛋白质溶液中，高 浓度的盐离子可夺取蛋白质分子的水 化层，使蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。 盐析时若溶液 pH 在蛋白质等电点则效 果更好。由于各种蛋白质分子颗粒大 小、亲水程度不同，故盐析所需的盐浓 度也不一样，因此调节混合蛋白质溶液 中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段 沉淀。 2、等电点沉淀法 蛋白质在静电状态时颗粒之间的 静电斥力最小，因而溶解度也最小，各 种蛋白质的等电点有差别，可利用调节 溶液的 pH 达到某一蛋白质的等电点使 之沉淀，但此法很少单独使用，可与盐 析法结合用。 3、低温有机溶剂沉淀法 用与水可混溶的有机溶剂，甲醇， 乙醇或丙酮，可使多数蛋白质溶解度降 低并析出，此法分辨力比盐析高，但蛋 白质较易变性，应在低温下进行。 根据蛋白质分子大小的差别，有 1、透析与超滤 透析法是利用半透膜将分子大小 不同的蛋白质分开。 超滤法是利用高压力或离心力，强 使水和其他小的溶质分子通过半透膜， 而蛋白质留在膜上，可选择不同孔径的 滤膜截留不同分子量的蛋白质。 2、凝胶过滤法 也称分子排阻层析或分子筛层析， 这是根据分子大小分离蛋白质混合物 最有效的方法之一。柱中最常用的填充