18 浙江大学 遗传学第十二章 103 ③. 单核苷酸多态性 (simple nucleotide polymorphisms，SNPs) ： 基因中点突变数量多，其中有些可产生RFLP（发生 在酶切位点）。 人类基因组中的编码序列中约有20万个SNPs标记， 非编码序列中约有 多10倍以上的标记。 C T GG TCGT CAG TCT T T AGTT GACCAGCAGTCAGAAATCAA C T GG TCGT CAG TCT T T AGTT GACCAGCAGTCAGAAATCAA SNP SNP位点可用寡核苷分子杂交来检测： € DNA芯片技术：将不同的寡核苷酸固定在芯片上 ¨标记 待测DNA ¨ 一次就可检测很多SNPs标记； € 特异等位基因动力学杂交法：利用液体杂交法检测，在 酶标偶联反应板的96孔中进行分子杂交¨用一种只与双链 DNA结合的荧光染料检测¨当两条DNA分子完全互补配 对时，形成双链DNA时才有信号¨检测SNPs。 浙江大学 遗传学第十二章 105 2. 遗传图谱的构建： ⑴. 人类基因组遗传图谱的构建： 家系分析法：分析8个家系134个成员（186个减数分裂） ¨ 根据5264个STR(简单重复序列)标记绘制而成（X染色体 分析是利用12家系170个成员（105个 减数分裂））¨将5264个标记定位在 2335个位点¨构建的人类基因组遗传 图谱密度为每个标记599 kb。 ⑵. 植物基因组遗传图谱的构建： ①. 选择亲本： 亲缘关系远，遗传差异性大，亲本间分子标记多态性强。 ②. 产生构图群体： 配制组合¨建立分离群体： €单交组合产生的F2； €衍生的F3、F4家系； €由连续多代自交或姐妹交 产生的重组近交系(recombinant inbred lines，RIL)； €通过单倍体加倍而成的双 单倍体(doubled haploids，DH)； €利用回交或三交(复交)产 生的后代群体。 浙江大学 遗传学第十二章 107 ③. 遗传标记的染色体定位： 有单体、三体、代换系与附加系分析等方法，依据 染色体剂量的差异¨将遗传标记定位在特定染色体上。 ∵当供体材料总DNA等量时，DNA杂交带的信号强弱 与该标记位于的染色体剂量成正比。 ④. 标记间的连锁分析： 通过分析分离群体内双亲间有多态性的遗传标记的 连锁交换情况和趋于协同分离的程度¨即可确定标记间 的连锁关系和遗传距离。 浙江大学 遗传学第十二章 108 (二)、物理图谱的构建： 1. 构建物理图谱的原因： ⑴. 遗传图谱的分辩率有限： 低等生物可重复进行多次杂交、测交¨在 短期内可产生大量群体、得到大量重组交换的 子代群体¨构建高密度的遗传图谱。 人类或其它高等生物难以获得大量的子代 群体，减数分裂的后代有限¨限制连锁分析。 ⑵. 遗传图谱的精确性不高： 染色体上有一些重组热点，其发生重组的 频率高于其它位点¨影响重组热点邻近区段的 遗传图谱准确性。18 浙江大学 遗传学第十二章 103 ③. 单核苷酸多态性 (simple nucleotide polymorphisms，SNPs) ： 基因中点突变数量多，其中有些可产生RFLP（发生 在酶切位点）。 人类基因组中的编码序列中约有20万个SNPs标记， 非编码序列中约有 多10倍以上的标记。 C T GG TCGT CAG TCT T T AGTT GACCAGCAGTCAGAAATCAA C T GG TCGT CAG TCT T T AGTT GACCAGCAGTCAGAAATCAA SNP SNP位点可用寡核苷分子杂交来检测： € DNA芯片技术：将不同的寡核苷酸固定在芯片上 ¨标记 待测DNA ¨ 一次就可检测很多SNPs标记； € 特异等位基因动力学杂交法：利用液体杂交法检测，在 酶标偶联反应板的96孔中进行分子杂交¨用一种只与双链 DNA结合的荧光染料检测¨当两条DNA分子完全互补配 对时，形成双链DNA时才有信号¨检测SNPs。 浙江大学 遗传学第十二章 105 2. 遗传图谱的构建： ⑴. 人类基因组遗传图谱的构建： 家系分析法：分析8个家系134个成员（186个减数分裂） ¨ 根据5264个STR(简单重复序列)标记绘制而成（X染色体 分析是利用12家系170个成员（105个 减数分裂））¨将5264个标记定位在 2335个位点¨构建的人类基因组遗传 图谱密度为每个标记599 kb。 ⑵. 植物基因组遗传图谱的构建： ①. 选择亲本： 亲缘关系远，遗传差异性大，亲本间分子标记多态性强。 ②. 产生构图群体： 配制组合¨建立分离群体： €单交组合产生的F2； €衍生的F3、F4家系； €由连续多代自交或姐妹交 产生的重组近交系(recombinant inbred lines，RIL)； €通过单倍体加倍而成的双 单倍体(doubled haploids，DH)； €利用回交或三交(复交)产 生的后代群体。 浙江大学 遗传学第十二章 107 ③. 遗传标记的染色体定位： 有单体、三体、代换系与附加系分析等方法，依据 染色体剂量的差异¨将遗传标记定位在特定染色体上。 ∵当供体材料总DNA等量时，DNA杂交带的信号强弱 与该标记位于的染色体剂量成正比。 ④. 标记间的连锁分析： 通过分析分离群体内双亲间有多态性的遗传标记的 连锁交换情况和趋于协同分离的程度¨即可确定标记间 的连锁关系和遗传距离。 浙江大学 遗传学第十二章 108 (二)、物理图谱的构建： 1. 构建物理图谱的原因： ⑴. 遗传图谱的分辩率有限： 低等生物可重复进行多次杂交、测交¨在 短期内可产生大量群体、得到大量重组交换的 子代群体¨构建高密度的遗传图谱。 人类或其它高等生物难以获得大量的子代 群体，减数分裂的后代有限¨限制连锁分析。 ⑵. 遗传图谱的精确性不高： 染色体上有一些重组热点，其发生重组的 频率高于其它位点¨影响重组热点邻近区段的 遗传图谱准确性