可作为无创性产前诊断唐氏综合征重要的候选表观遗传标记 5、单基因遗传病筛查。 单基因遗传病是我国常见出生缺陷的重要原因之一,较为常见且研究较多的有地中海贫 血、苯丙酮尿症、肝豆状核变性、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷、软骨发育不良、囊性纤维化 等。除部分单基因遗传病可通过手术加以矫正外,绝大部分是致死、致残、致畸性疾病,且 目前均无法治疗,产前诊断则是避免致死、致残、致畸性疾病胎儿出生的重要手段 在β珠蛋白生成障碍性贫血的诊断中, Galbiati等采用PNA针夹术(PNA- clamping),以 微电子芯片技术对32例孕妇诊断中通过检测7个常见的β珠蛋白突变得到100%的准确度 和983%的特异性,这一研究日后若应用于临床,将对出生前临床干预具有重大指导意义。 技术优缺点 优点 传统产前诊断方法一般采用羊膜腔穿刺、绒毛膜取样和脐静脉穿刺等,它们都具有创伤 性,有发生感染、出血甚至流产、死胎的可能 长久以来人们致力于利用孕妇外周血中存在的胎儿有核细胞进行无创性产前诊断,但由 于母体外周血中胎儿有核细胞极少,每毫升血中仅有1~2个,其分离、富集方法繁琐复杂 且价格昂贵,其临床应用至今不能推广。 孕妇外周血中胎儿游离DNA的发现为无创性产前诊断带来了新的希望,胎儿游离DNA 含量相对高,提取及分析过程简单,易于发展为可应用于临床的大样本高通量的检测方法。 抽取孕妇外周血检测胎儿游离DNA来进行产前诊断,无创伤取样,准确率高、灵敏度高、 特异性强,且结果不受母体孕周(孕12周后即可检测)、生育年龄等因素影响,不会对孕 妇及胎儿产生伤害。另外胎儿DNA分娩后很快被清除,不会受前次妊娠的影响。无创性产 前基因检测不仅能够提高检测的准确率与效率,而且消除了传统检测方法给亼们带来的精神 负担。 因此,对孕妇外周血中胎儿游离DNA的检测及其临床应用研究将对无创性产前诊断技 术的发展产生重大影响。同时,将基因组测序技术应用于临床诊断,也将更好地加强我国出 生缺陷的二级预防。 缺点 1、尽管胎儿游离DNA具有众多的优势,但仍存在一些问题有待解决,如胎儿游离D№A的 来源及清除机制还不甚清楚。 关于胎儿DNA的来源与释放机制研究 一般认为胎儿游离DNA释放到母血中的机制可能有以下3种 (1)胎儿有核细胞进入母体外周血后发生凋亡释放出游离DNA。 妊娠期进入母体血循环的胎儿细胞包括淋巴细胞、粒细胞和有核红细胞等。胎儿细胞有 穿越绒毛毛细血管内皮和滋养层基膜的现象,胎儿细胞在穿越胎盘时可能发生凋亡。因此孕 妇血浆中的游离胎儿DNA可来源于进入母体血的胎儿有核细胞。但无法解释母体外周血中 胎儿细胞很少而血浆中游离胎儿DNA含量丰富。 (2)胎儿DNA经母-胎界面进入母血 游离胎儿DNA在羊水中的浓度近乎于母体血浆中的200倍,推测浓度梯度可能导致 DNA分子的直接传输。虽然在脐血浆中可测得母源性DNA,但仅占胎儿血循环总游离DNA 的09%(0.2%~84%),而母血中胎儿游离DNA占母体血循环总游离DNA的143%(2.3% 54%),说明游离DNA虽可直接穿越胎盘屏障,但此来源的可能也很少。 (3)胎盘滋养层细胞凋亡后释放游离的胎儿DNA。该说法获得了较多的实验支持。可作为无创性产前诊断唐氏综合征重要的候选表观遗传标记。 5、单基因遗传病筛查。 单基因遗传病是我国常见出生缺陷的重要原因之一，较为常见且研究较多的有地中海贫 血、苯丙酮尿症、肝豆状核变性、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷、软骨发育不良、囊性纤维化 等。除部分单基因遗传病可通过手术加以矫正外，绝大部分是致死、致残、致畸性疾病，且 目前均无法治疗，产前诊断则是避免致死、致残、致畸性疾病胎儿出生的重要手段。 在β珠蛋白生成障碍性贫血的诊断中，Galbiati 等采用 PNA 钳夹术(PNA-clamping)，以 微电子芯片技术对 32 例孕妇诊断中通过检测 7 个常见的 β 珠蛋白突变得到 100%的准确度 和 98.3%的特异性，这一研究日后若应用于临床，将对出生前临床干预具有重大指导意义。 三、技术优缺点 优点： 传统产前诊断方法一般采用羊膜腔穿刺、绒毛膜取样和脐静脉穿刺等，它们都具有创伤 性，有发生感染、出血甚至流产、死胎的可能。 长久以来人们致力于利用孕妇外周血中存在的胎儿有核细胞进行无创性产前诊断，但由 于母体外周血中胎儿有核细胞极少，每毫升血中仅有 1～2 个，其分离、富集方法繁琐复杂， 且价格昂贵，其临床应用至今不能推广。 孕妇外周血中胎儿游离 DNA 的发现为无创性产前诊断带来了新的希望，胎儿游离 DNA 含量相对高，提取及分析过程简单，易于发展为可应用于临床的大样本高通量的检测方法。 抽取孕妇外周血检测胎儿游离 DNA 来进行产前诊断，无创伤取样，准确率高、灵敏度高、 特异性强，且结果不受母体孕周（孕 12 周后即可检测）、生育年龄等因素影响，不会对孕 妇及胎儿产生伤害。另外胎儿 DNA 分娩后很快被清除，不会受前次妊娠的影响。无创性产 前基因检测不仅能够提高检测的准确率与效率，而且消除了传统检测方法给人们带来的精神 负担。 因此，对孕妇外周血中胎儿游离 DNA 的检测及其临床应用研究将对无创性产前诊断技 术的发展产生重大影响。同时，将基因组测序技术应用于临床诊断，也将更好地加强我国出 生缺陷的二级预防。 缺点： 1、尽管胎儿游离 DNA 具有众多的优势，但仍存在一些问题有待解决，如胎儿游离 DNA 的 来源及清除机制还不甚清楚。 关于胎儿 DNA 的来源与释放机制研究： 一般认为胎儿游离 DNA 释放到母血中的机制可能有以下 3 种。 (1)胎儿有核细胞进入母体外周血后发生凋亡释放出游离 DNA。 妊娠期进入母体血循环的胎儿细胞包括淋巴细胞、粒细胞和有核红细胞等。胎儿细胞有 穿越绒毛毛细血管内皮和滋养层基膜的现象，胎儿细胞在穿越胎盘时可能发生凋亡。因此孕 妇血浆中的游离胎儿 DNA 可来源于进入母体血的胎儿有核细胞。但无法解释母体外周血中 胎儿细胞很少而血浆中游离胎儿 DNA 含量丰富。 (2)胎儿 DNA 经母-胎界面进入母血。 游离胎儿 DNA 在羊水中的浓度近乎于母体血浆中的 200 倍，推测浓度梯度可能导致 DNA 分子的直接传输。虽然在脐血浆中可测得母源性 DNA，但仅占胎儿血循环总游离 DNA 的 0.9%(0.2%～ 8.4%)，而母血中胎儿游离 DNA 占母体血循环总游离 DNA 的 14.3%(2.3%～ 64%)，说明游离 DNA 虽可直接穿越胎盘屏障，但此来源的可能也很少。 (3)胎盘滋养层细胞凋亡后释放游离的胎儿 DNA。该说法获得了较多的实验支持