国家自然科学基金申请书 (2)药物血清对0B优势ER亚型的调节 OB原代培养(酶消化法)、鉴定 确定细胞密度,模仿雌激素撤退现象 加入不同浓度的药物血清 电镜观察OB细胞器变化:FCM分析DNA细胞周期和细胞调亡 实时定量RT-PCR分析ERa/β、 Aromatase的mRNA变化, (3)介导0B及内膜癌细胞增殖的优势BR亚型及其胞内信号转导途径 建立优势ER亚型沉默表达的hMG63和HECl-B细胞系 加入不同浓度的药物血清或生理浓度的E2/DHEA 检测两种细胞的DNA周期和调亡;分析pERK1/2的表达 确定两种细胞优势表达的ER亚型及其介导的信号途径对细胞增殖的影响 【实验方案】 (1)绝经后骨质疏松症中医辨证 绝经前后妇女年近五旬,肾中精气渐衰。肾精不足则骨无以充,故骨骼酸楚疼痛;甚者,骨枯 而髓减,发为骨痿,并可见骨折。精血不足,肾水不能上济心火,则心火上炎。肾虚则气化不及 气血失调而产生痰瘀,痰瘀又可进一步加重肾虚,从而促进骨质疏松的产生。 治则:补肾壮骨,宁心泻 处方:生地18知母15补骨脂12仙灵脾12巴戟天12 枸杞子12酸枣仁9黄柏9 方解:生地、知母滋补肾阴,为君药。仙灵脾、巴戟天温补肾阳,补骨脂补肾活血,为臣药, 共助君药补肾益精,使得阴阳平衡。枸杞子滋肝以补肾,酸枣仁宁心安神,为佐药。黄柏泻相火, 以使水火相济;并能引诸药入肾经。全方以补肾为主,有坚肾壮骨髓之功。 版本1.018.551国家自然科学基金申请书 第 9 页 版本 1.018.551 （2） 药物血清对 OB 优势 ER 亚型的调节 OB 原代培养（酶消化法）、鉴定 ↓ 确定细胞密度，模仿雌激素撤退现象 ↓ 加入不同浓度的药物血清 ↓ 电镜观察 OB 细胞器变化；FCM 分析 DNA 细胞周期和细胞调亡 ↓ 实时定量 RT-PCR 分析 ERα/β、Aromatase 的 mRNA 变化， （3）介导 OB 及内膜癌细胞增殖的优势 ER 亚型及其胞内信号转导途径 建立优势 ER 亚型沉默表达的 hMG63 和 HEC1-B 细胞系 ↓ 加入不同浓度的药物血清或生理浓度的 E2/DHEA ↓ 检测两种细胞的 DNA 周期和调亡；分析 pERK1/2 的表达 ↓ 确定两种细胞优势表达的 ER 亚型及其介导的信号途径对细胞增殖的影响 【实验方案】 （1） 绝经后骨质疏松症中医辨证： 绝经前后妇女年近五旬，肾中精气渐衰。肾精不足则骨无以充，故骨骼酸楚疼痛；甚者，骨枯 而髓减，发为骨痿，并可见骨折。精血不足，肾水不能上济心火，则心火上炎。肾虚则气化不及， 气血失调而产生痰瘀，痰瘀又可进一步加重肾虚，从而促进骨质疏松的产生。 治则：补肾壮骨，宁心泻火。 处方：生地 18 知母 15 补骨脂 12 仙灵脾 12 巴戟天 12 枸杞子 12 酸枣仁 9 黄柏 9 方解：生地、知母滋补肾阴，为君药。仙灵脾、巴戟天温补肾阳，补骨脂补肾活血，为臣药， 共助君药补肾益精，使得阴阳平衡。枸杞子滋肝以补肾，酸枣仁宁心安神，为佐药。黄柏泻相火， 以使水火相济；并能引诸药入肾经。全方以补肾为主，有坚肾壮骨髓之功