第二节pro定量法 物理方法:折射率、比重、紫外吸收等方法,操作简便。 化学方法:凯氏定氮法、杜马法、双缩脲法、福林( Folin)—酚试剂法、染料结合法。 方法中定 双缩脲法,物理法,是利用pro共性(如含氮量、肽键、折射率等) 是利用pro的特定氨基酸残基 碱性基团等)的 法。最基本和最常用的方法是测定总氮量,再由总氮量计算蛋白质含量。凯氏定 氮法和杜马法。 凯氏定氮法:最准确和操作最简单的方法之一同时测定多个样品是法定的标准检方法。 ●杜马法:多半用于有机分析,很少用于食品分析 双缩脲反应法:在碱性环境中,双缩脲与CuSO结合生成红紫色的络合物,此法称为双 缩脲反应法。双缩脲法和酚试剂法是生物领域进行科学研究经常使用 染料结合法:正在急速发展的新方法 半微量凯氏定氮法(微量、常量凯氏定氮法) 原理:蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化使蛋白质分解。分解的氨与硫酸生成硫 量築反痰素鍍使备盛白周图 硼酸吸收后,再用标准硫酸或盐酸滴定,根据酸的 、过程:消化—蒸馏—吸收与滴定 1)消化:样品中含氮有机化合物经浓H2SO加热消化,SO2使N还原为NH3气,NH 与硫酸结合成(NH3) 。硫酸使有机物脱水,有机物炭化生成碳,C将H2SO还原 为SO2,C变为CO2。SO2使N还原为NH,SO2氧化为SO3, (2)蒸馏:(NH3)2SO4在碱性条件下,释放出氨。第二节 pro定量法 ⚫ 物理方法：折射率、比重、紫外吸收等方法，操作简便。 ⚫ 化学方法：凯氏定氮法、杜马法、双缩脲法、福林(Folin)——酚试剂法、染料结合法。 ⚫ 这些方法中定氮法、双缩脲法，物理法，是利用pro共性（如含氮量、肽键、折射率等） 的方法。其它方法是利用pro的特定氨基酸残基（芳香基、酸性基团、碱性基团等）的 方法。 最基本和最常用的方法是测定总氮量，再由总氮量计算蛋白质含量。凯氏定 氮法和杜马法。 ⚫ 凯氏定氮法：最准确和操作最简单的方法之一同时测定多个样品是法定的标准检方法。 ⚫ 杜马法：多半用于有机分析，很少用于食品分析 ⚫ 双缩脲反应法：在碱性环境中，双缩脲与CuSO4结合生成红紫色的络合物，此法称为双 缩脲反应法。双缩脲法和酚试剂法是生物领域进行科学研究经常使用的方法。 ⚫ 染料结合法：正在急速发展的新方法。 ⚫ 一、半微量凯氏定氮法（微量、常量凯氏定氮法） ⚫ 1、原理：蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化使蛋白质分解。分解的氨与硫酸生成硫 酸铵，然后碱化蒸馏使氨分离。用硼酸吸收后，再用标准硫酸或盐酸滴定，根据酸的 消耗量乘以换算系数。即为蛋白质含量。 ⚫ 2、过程：消化——蒸馏——吸收与滴定 ⚫ （1）消化：样品中含氮有机化合物经浓H2SO4加热消化，SO2使N还原为NH3气，NH3 与硫酸结合成（NH3）2SO4。硫酸使有机物脱水，有机物炭化生成碳，C将H2SO4还原 为SO2，C变为CO2。SO2使N还原为NH3，SO2氧化为SO3， NH3+H2SO4—— ——（NH4）2SO4 ⚫ （2）蒸馏：（NH3）2SO4在碱性条件下，释放出氨