第九章多糖的测定 第一节淀粉的测定 测定淀粉含量对于决定用途具有重要意义: ●1、淀粉是供给人体热量的主要来源。 2、淀粉在食品中的作用是作为増稠剂、胶体生成剂、保潮剂、乳化剂、粘合剂等。 、淀粉的测定方法: 一)淀粉的物理检验法:淀粉因其品种不同,淀粉的大小和形状也不同。用显微镜 分析法可鉴别不同品种的淀粉。 ●(二)淀粉含量的测定方法 、酶水解法: (1)概念:淀粉用麦芽淀粉酶水解成二糖,再用酸将二糖水解为单糖,然后测定由水 解所得到的单糖。(还原糖) (2)常用于液化的淀粉酶是麦芽淀粉酶。它是α—淀粉酶和β一淀粉酶的混合物。 3)酸直接水解法:淀粉的测定方法也可采用酸直接水解法,但酸水解法不仅是淀粉 水解,而且也能分解半纤维素,结果产生了具有还原力的木糖、阿拉伯糖等单糖,使 淀粉测定所得的结果较实际含量偏高
第九章 多糖的测定 第一节 淀粉的测定 ⚫ 一、测定淀粉含量对于决定用途具有重要意义： ⚫ 1、淀粉是供给人体热量的主要来源。 ⚫ 2、淀粉在食品中的作用是作为增稠剂、胶体生成剂、保潮剂、乳化剂、粘合剂等。 ⚫ 二、淀粉的测定方法： ⚫ （一）淀粉的物理检验法：淀粉因其品种不同，淀粉的大小和形状也不同。用显微镜 分析法可鉴别不同品种的淀粉。 ⚫ （二）淀粉含量的测定方法： ⚫ 1、酶水解法： ⚫ （1）概念：淀粉用麦芽淀粉酶水解成二糖，再用酸将二糖水解为单糖，然后测定由水 解所得到的单糖。（还原糖） ⚫ （2）常用于液化的淀粉酶是麦芽淀粉酶。它是⍺—淀粉酶和ß—淀粉酶的混合物。 ⚫ （3）酸直接水解法：淀粉的测定方法也可采用酸直接水解法，但酸水解法不仅是淀粉 水解，而且也能分解半纤维素，结果产生了具有还原力的木糖、阿拉伯糖等单糖，使 淀粉测定所得的结果较实际含量偏高
°(4)酶水解法的优点:在一定条件下,用α淀粉酶处理样品,则能使淀粉 与半纤维素等某些多糖分开来。因为α淀粉酶具有严格的选择性,它只使淀 粉液化变成低分子糊精和可溶性糖分,而对半纤维素不起作用。在用α一淀粉 酶液化淀粉除去半纤维素等不溶性残留物后,再用酸水解使生成葡萄糖,所 得结果比较准确。这种酶水解作用,叫作选择性水解。 (5)酶水解法测定淀粉的具体步骤: ●a:样品的处理:将磨碎样品置漏斗中,用乙醚50m分数次洗涤,除去脂肪, 再用10%乙醇洗去可溶性糖分,先5次。 ●b;酶水解:将滤纸上残留物用水移至烧杯内,水浴加热直到淀粉糊仳。冷却 至60℃,加麦芽汁20m在60℃保温1小时,再重复加热冷却,保温冷却过滤, 将滤液定容250ml ●c:酸水解,吸取滤液加λ1:4硫酸,放在120-130℃油浴中保持沸腾56min 用40%NaOH滴定至碱性。 ●d:用非林氏试剂测定葡萄糖含量,同时做空白试验。 ●e:计算:淀粉=[(A-B)*0.9*100W*(50/250)*(V/100*100 A:样品中淀粉相当于还原糖重量(mg) B空白相当于还原糖的重量 0.9:还原糖换算为淀粉因数 Vl00:样液酸解后稀释100m取VmlW:样品重量(g)
⚫ （4）酶水解法的优点：在一定条件下，用⍺—淀粉酶处理样品，则能使淀粉 与半纤维素等某些多糖分开来。因为⍺—淀粉酶具有严格的选择性，它只使淀 粉液化变成低分子糊精和可溶性糖分，而对半纤维素不起作用。在用⍺—淀粉 酶液化淀粉除去半纤维素等不溶性残留物后，再用酸水解使生成葡萄糖，所 得结果比较准确。这种酶水解作用，叫作选择性水解。 ⚫ （5）酶水解法测定淀粉的具体步骤： ⚫ a:样品的处理：将磨碎样品置漏斗中，用乙醚50ml分数次洗涤，除去脂肪， 再用10%乙醇洗去可溶性糖分，先5次。 ⚫ b:酶水解：将滤纸上残留物用水移至烧杯内，水浴加热直到淀粉糊化。冷却 至60℃，加麦芽汁20ml在60℃保温1小时，再重复加热冷却，保温冷却过滤， 将滤液定容250ml。 ⚫ c:酸水解，吸取滤液加入1：4硫酸，放在120—130℃油浴中保持沸腾5—6min 用40%NaOH 滴定至碱性。 ⚫ d:用非林氏试剂测定葡萄糖含量，同时做空白试验。 ⚫ e:计算：淀粉=[（A-B）*0.9*100]/[W*(50/250)*(V/100)*100] A:样品中淀粉相当于还原糖重量（mg) B:空白相当于还原糖的重量 0.9：还原糖换算为淀粉因数 V/100：样液酸解后稀释100ml取Vml W：样品重量（g）
第二节纤维的测定 植物性食品内含有粗纤维,它集中存在于谷类的麸、糠、果蔬的表皮及其纤维样组织 之中。从现代营养学的观点来看,我们膳食中每天需要摄入一定数量的纤维(称为膳 食纤维),它可防止包括阑尾炎、心脏病和结肠癌等多种疾病,所以,深入了解膳食 纤维的特性及其分析方法更具有迫切的现实意义。此外,粗纤维的含量是果蔬制品的 项质量指标,借此可以鉴定果蔬的鲜嫩度。例如:青豌豆按其鲜嫩程度分为三级, 其粗纤维含量分别为:一级18%左右,二级22%左右,三级25%左右 概念: 粗纤维:指动物饲料中那些对稀酸、稀碱难溶的,家畜(特别是反刍动物)不容易消 化的部分,其中主要的成分是果胶、半纤维、纤维素和木质素。测定粗纤维,可估算 出食品中不能消化的部分,借此可评定该食品的营养价值及其经济价值,历来的食品 成分表都提供植物性食品的粗纤维含量。 膳食纤维:是指人们的消化系统或者消化系统中的酶不能消化、分解、吸收的物质 包括纤维素、半纤维素、木质素、果胶物质。 ●二、粗纤维的测定 测定粗纤维常用的方法是将热的稀酸稀碱与样品相继共煮,并分别经过滤、洗涤残 留物等操作。这时,酸可将淀粉、果胶物质和部分半纤维素水解除去;而碱能溶解除 去蛋白质、部分半纤维素及部分木质素,还除去了脂肪。 测定原理:在硫酸作用下,样品中的糖、淀粉、果胶质和半纤维素水解除去后,再 用碱处理除去蛋白质和脂肪酸,残留物为粗纤维,如其中含有不溶于酸、碱的杂质, 可灰化后除去
第二节 纤维的测定 ⚫ 植物性食品内含有粗纤维，它集中存在于谷类的麸、糠、果蔬的表皮及其纤维样组织 之中。从现代营养学的观点来看，我们膳食中每天需要摄入一定数量的纤维（称为膳 食纤维），它可防止包括阑尾炎、心脏病和结肠癌等多种疾病，所以，深入了解膳食 纤维的特性及其分析方法更具有迫切的现实意义。此外，粗纤维的含量是果蔬制品的 一项质量指标，借此可以鉴定果蔬的鲜嫩度。例如：青豌豆按其鲜嫩程度分为三级， 其粗纤维含量分别为：一级1.8%左右，二级2.2%左右，三级2.5%左右。 ⚫ 一、概念： ⚫ 粗纤维：指动物饲料中那些对稀酸、稀碱难溶的，家畜（特别是反刍动物）不容易消 化的部分，其中主要的成分是果胶、半纤维、纤维素和木质素。测定粗纤维，可估算 出食品中不能消化的部分，借此可评定该食品的营养价值及其经济价值，历来的食品 成分表都提供植物性食品的粗纤维含量。 ⚫ 膳食纤维：是指人们的消化系统或者消化系统中的酶不能消化、分解、吸收的物质。 包括纤维素、半纤维素、木质素、果胶物质。 ⚫ 二、粗纤维的测定 ⚫ 测定粗纤维常用的方法是将热的稀酸稀碱与样品相继共煮，并分别经过滤、洗涤残 留物等操作。这时，酸可将淀粉、果胶物质和部分半纤维素水解除去；而碱能溶解除 去蛋白质、部分半纤维素及部分木质素，还除去了脂肪。 ⚫ 1、测定原理：在硫酸作用下，样品中的糖、淀粉、果胶质和半纤维素水解除去后，再 用碱处理除去蛋白质和脂肪酸，残留物为粗纤维，如其中含有不溶于酸、碱的杂质， 可灰化后除去
2、具体步骤 ●(1)取20-30g捣碎样品,移入500ml锥形瓶,加入20oml煮沸1.25%硫酸溶液, 维持30min ●(2)过滤(亚麻布)用沸水洗至洗液不呈酸性 ●(3)再用200ml煮沸12.5g/LKOH将麻布上残留物洗入原锥形瓶中,煮沸 30min,取下过滤、洗涤。放入重融坩埚(漏斗)中抽滤。再依次用乙醇和乙 醚洗涤一次。 (4)将坩埚和内容物放在105℃烘箱中烘干称重至恒重 ●(5)计算:x%=G/m*100 ●G-残余物的质量 ●M--样品重量
⚫ 2、具体步骤： ⚫ （1）取20—30g捣碎样品，移入500ml锥形瓶，加入200ml煮沸1.25%硫酸溶液， 维持30min ⚫ （2）过滤（亚麻布）用沸水洗至洗液不呈酸性 ⚫ （3）再用200ml煮沸12.5g/L KOH将麻布上残留物洗入原锥形瓶中，煮沸 30min，取下过滤、洗涤。放入重融坩埚（漏斗）中抽滤。再依次用乙醇和乙 醚洗涤一次。 ⚫ （4）将坩埚和内容物放在105℃烘箱中烘干称重至恒重。 ⚫ （5）计算：x%=G/m *100 ⚫ G----残余物的质量 ⚫ M----样品重量
第三节果胶物质的测定 果胶物质是一种植物胶,可作为食品生产中的胶冻材料和增稠剂,它的用途甚广 果胶主要用途: 1、用果胶制造果冻和糖果 2、果胶物质是影响果酱制品稠度和凝冻性的重要因素 3、果胶在柑桔汁生产中对混浊体起稳定剂的作用等。果胶在医药上的应用,也具有重 要意义。 4、它可以作为治疗胃肠道及胃溃疡等疾病的良好药剂 果胶,特别是低甲氧基果胶,因为它能与铅、汞等有害金属形成人体不能吸收的溶 解物,因而可用作金属中毒的一种良好解毒剂和预防剂 果胶的测定方法 ●1、重量法:是用沉淀剂使果胶物质沉淀析出,而后测定重量的方法。 ●(1)沉淀剂有两类:电解质、如氯化钠、氯化钙 有机溶剂:如甲醇、乙醇、丙酮等。 (2)测定步骤 ●a.准确称取新鲜样品,加水煮沸一小时。冷却后定容250m. ●b过滤吸取滤液25nl,加入0. I monAcH溶液100ml,再加入50 molmol醋酸溶液,和 5σml2 molCacL溶液,加热沸腾5min后立即用烘干至恒重的滤纸过滤,用热水洗
第三节 果胶物质的测定 ⚫ 果胶物质是一种植物胶,可作为食品生产中的胶冻材料和增稠剂,它的用途甚广. ⚫ 一、果胶主要用途： ⚫ 1、用果胶制造果冻和糖果。 ⚫ 2、果胶物质是影响果酱制品稠度和凝冻性的重要因素。 ⚫ 3、果胶在柑桔汁生产中对混浊体起稳定剂的作用等。果胶在医药上的应用，也具有重 要意义。 ⚫ 4、它可以作为治疗胃肠道及胃溃疡等疾病的良好药剂。 ⚫ 5、果胶，特别是低甲氧基果胶，因为它能与铅、汞等有害金属形成人体不能吸收的溶 解物，因而可用作金属中毒的一种良好解毒剂和预防剂。 ⚫ 二、果胶的测定方法 ⚫ 1、重量法：是用沉淀剂使果胶物质沉淀析出，而后测定重量的方法。 ⚫ （1）沉淀剂有两类：电解质、如氯化钠、氯化钙 ⚫ 有机溶剂：如甲醇、乙醇、丙酮等。 ⚫ （2）测定步骤： ⚫ a.准确称取新鲜样品，加水煮沸一小时。冷却后定容250ml. ⚫ b.过滤吸取滤液25ml，加入0.1molNaOH溶液100ml，再加入50ml1mol醋酸溶液，和 50ml2molCacL2溶液，加热沸腾5min后立即用烘干至恒重的滤纸过滤，用热水洗
c把带滤渣的滤纸放在预先烘干至恒重的称量瓶内,置105℃烘箱中烘至恒重。 d计算 果胶质(%)=(0.9235*G)/W*(25/250)]*100 ●G:滤渣重量克数=W1-W2 W:样品重量克数 W1-以果胶酸钙重和玻璃灯芯漏斗 ●W2--玻璃灯芯漏斗 ●09235:果胶酸钙换算为果胶质的系数 咔唑比色法:基于果胶物质水解,生成物一(半乳糖醛酸)在强酸中与咔唑的缩合 反应。生成紫红色化合物,其呈色强度与半乳糖醛酸浓度成正比。可进行比色定量测 定
c.把带滤渣的滤纸放在预先烘干至恒重的称量瓶内，置105℃烘箱中烘至恒重。 ⚫ d.计算： ⚫ 果胶质（%）=(0.9235*G)/[W*(25/250)]*100 ⚫ G：滤渣重量克数=W1 -W2 ⚫ W：样品重量克数 ⚫ W1 ---以果胶酸钙重和玻璃灯芯漏斗 ⚫ W2 ---玻璃灯芯漏斗 ⚫ 0.9235：果胶酸钙换算为果胶质的系数 ⚫ 2、咔唑比色法：基于果胶物质水解，生成物一（半乳糖醛酸）在强酸中与咔唑的缩合 反应。生成紫红色化合物，其呈色强度与半乳糖醛酸浓度成正比。可进行比色定量测 定
第十章蛋白质的测定 第一节食品中pro的含量 ●蛋白质是复杂的含氮有机化合物,分子量很大。由C、H、O、N、S五种元素 组成。蛋白质溶液是典型的胶体分散系,是具有光学活性的两性物质。 食品中蛋白质的含量分布是不平衡的。一般植物组织的含量低于动物组 织。植物中pro含量很少,一般为0.5-3%(鲜重),在果实中一般为04 5%(鲜重),黄豆中pro可达40%。由动物中肌肉及内脏中po含量校多。牛 肉20.1%乳粉26.2% 蛋白质的定量是基于测定总有机氮。但某些物质又含有大量的非蛋白氮化 合物(如马铃薯等),必须把pro提出来,分别测总氮及非蛋白氮就得到纯蛋 白氮。Pro的量一般是按照总氮量乘上一个合适的蛋白质换算系数来求得的。 这个系数决定于物质中pro的含氮量。Pro的含氮量一般为15-176%。如为 16%则换算系数为=625(鸡蛋、青豆、肉、玉米等)
⚫ 蛋白质是复杂的含氮有机化合物，分子量很大。由C、H、O、N、S五种元素 组成。蛋白质溶液是典型的胶体分散系，是具有光学活性的两性物质。 ⚫ 食品中蛋白质的含量分布是不平衡的。一般植物组织的含量低于动物组 织。植物中pro含量很少，一般为0.5—3%（鲜重），在果实中一般为 0.4— 1.5%（鲜重），黄豆中pro可达40%。由动物中肌肉及内脏中pro含量校多。牛 肉20.1%,乳粉26.2% ⚫ 蛋白质的定量是基于测定总有机氮。但某些物质又含有大量的非蛋白氮化 合物（如马铃薯等），必须把pro提出来，分别测总氮及非蛋白氮就得到纯蛋 白氮。Pro的量一般是按照总氮量乘上一个合适的蛋白质换算系数来求得的。 这个系数决定于物质中pro的含氮量。Pro的含氮量一般为15—17.6% 。如为 16%则换算系数为=6.25（鸡蛋、青豆、肉、玉米等） 第十章 蛋白质的测定 第一节 食品中pro的含量
第二节pro定量法 物理方法:折射率、比重、紫外吸收等方法,操作简便。 化学方法:凯氏定氮法、杜马法、双缩脲法、福林( Folin)—酚试剂法、染料结合法。 方法中定 双缩脲法,物理法,是利用pro共性(如含氮量、肽键、折射率等) 是利用pro的特定氨基酸残基 碱性基团等)的 法。最基本和最常用的方法是测定总氮量,再由总氮量计算蛋白质含量。凯氏定 氮法和杜马法。 凯氏定氮法:最准确和操作最简单的方法之一同时测定多个样品是法定的标准检方法。 ●杜马法:多半用于有机分析,很少用于食品分析 双缩脲反应法:在碱性环境中,双缩脲与CuSO结合生成红紫色的络合物,此法称为双 缩脲反应法。双缩脲法和酚试剂法是生物领域进行科学研究经常使用 染料结合法:正在急速发展的新方法 半微量凯氏定氮法(微量、常量凯氏定氮法) 原理:蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化使蛋白质分解。分解的氨与硫酸生成硫 量築反痰素鍍使备盛白周图 硼酸吸收后,再用标准硫酸或盐酸滴定,根据酸的 、过程:消化—蒸馏—吸收与滴定 1)消化:样品中含氮有机化合物经浓H2SO加热消化,SO2使N还原为NH3气,NH 与硫酸结合成(NH3) 。硫酸使有机物脱水,有机物炭化生成碳,C将H2SO还原 为SO2,C变为CO2。SO2使N还原为NH,SO2氧化为SO3, (2)蒸馏:(NH3)2SO4在碱性条件下,释放出氨
第二节 pro定量法 ⚫ 物理方法：折射率、比重、紫外吸收等方法，操作简便。 ⚫ 化学方法：凯氏定氮法、杜马法、双缩脲法、福林(Folin)——酚试剂法、染料结合法。 ⚫ 这些方法中定氮法、双缩脲法，物理法，是利用pro共性（如含氮量、肽键、折射率等） 的方法。其它方法是利用pro的特定氨基酸残基（芳香基、酸性基团、碱性基团等）的 方法。 最基本和最常用的方法是测定总氮量，再由总氮量计算蛋白质含量。凯氏定 氮法和杜马法。 ⚫ 凯氏定氮法：最准确和操作最简单的方法之一同时测定多个样品是法定的标准检方法。 ⚫ 杜马法：多半用于有机分析，很少用于食品分析 ⚫ 双缩脲反应法：在碱性环境中，双缩脲与CuSO4结合生成红紫色的络合物，此法称为双 缩脲反应法。双缩脲法和酚试剂法是生物领域进行科学研究经常使用的方法。 ⚫ 染料结合法：正在急速发展的新方法。 ⚫ 一、半微量凯氏定氮法（微量、常量凯氏定氮法） ⚫ 1、原理：蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化使蛋白质分解。分解的氨与硫酸生成硫 酸铵，然后碱化蒸馏使氨分离。用硼酸吸收后，再用标准硫酸或盐酸滴定，根据酸的 消耗量乘以换算系数。即为蛋白质含量。 ⚫ 2、过程：消化——蒸馏——吸收与滴定 ⚫ （1）消化：样品中含氮有机化合物经浓H2SO4加热消化，SO2使N还原为NH3气，NH3 与硫酸结合成（NH3）2SO4。硫酸使有机物脱水，有机物炭化生成碳，C将H2SO4还原 为SO2，C变为CO2。SO2使N还原为NH3，SO2氧化为SO3， NH3+H2SO4—— ——（NH4）2SO4 ⚫ （2）蒸馏：（NH3）2SO4在碱性条件下，释放出氨
(3)吸收与滴定:蒸馏时放出的氨,可用一定量的标准硫酸溶液吸收,用标准NaOH 反滴定过量的H2SO,(或用硼酸溶液吸收,再用标准HCL或H2SO4溶液直接滴定。) 则计算出总氮量,推算pro含量 反应如下:2 CH3CHNH2COOH+13H2SO4 ●(NH4)2SO4+6CO2+12SO2+16H2O(pro为氨基丙酸) .(NH4)2SO4+2NaOH--2 NH3 +2H,0+Na2SO4 NH4HB40+HCL+5H2O-NH4CL+4H3 BO3 3、样品的分解条件: 在消化过程中,为了加速分解过程,常加入下列物质 )K2SO4或Na2SO4作用:是提高溶液的沸点,加速对有机物的分解作用。 a2SO不及K2SO4效果好 (2)催化剂:而且 Hgo. hg是剧毒物质。注意通风污染环境价格贵。 ● a Cuso4作催化剂呈蓝色,还可作下一步蒸馏时作碱性反应的指示剂。 ●b氧化汞和汞:HgO是效能较高的催化剂,可得氮的最佳回收率。注意:容易生成硫化 汞沉淀可使反应液引起暴沸,防止暴沸的措施是添加锌粒。而且Hgo.Hg是剧毒物质。 注意通风污染环境价格贵 c硒粉:催化效能较强,可大大缩短消化时间,但用量不宜过多,消化时间不可过久」 并小心控制温度,否则将引起氮素损失。 (3)氧化剂:添加氧化剂是帮助有机物消化,但要防止NH3进一步氧化为N ●a次氯酸钾和高锰酸钾:强氧化剂会使氨氧化为氮而损失,一般不易使用,但含C高时, 可用KmnO4。 ●b过氧化氢:消化速度高,操作简便,须冷却后加入过氧化氢
⚫ （3）吸收与滴定：蒸馏时放出的氨，可用一定量的标准硫酸溶液吸收，用标准NaOH 反滴定过量的H2SO4，（或用硼酸溶液吸收，再用标准HCL或H2SO4溶液直接滴定。） 则计算出总氮量，推算pro含量。 ⚫ 反应如下：2CH3CHNH2COOH+13H2SO4—— ⚫ （NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2O （ pro为氨基丙酸） ⚫ （NH4）2SO4+2NaOH——２NH3+2H2O+Na2SO4 ⚫ NH4HB4O7+HCL+5H2O——NH4CL+4H3BO3 ⚫ 3、样品的分解条件： ⚫ 在消化过程中，为了加速分解过程，常加入下列物质： ⚫ （1）K2SO4或Na2SO4 作用：是提高溶液的沸点，加速对有机物的分解作用。 Na2SO4不及K2SO4效果好。 ⚫ （2）催化剂：而且Hgo.Hg是剧毒物质。注意通风污染环境价格贵。 ⚫ a.CuSO4作催化剂呈蓝色，还可作下一步蒸馏时作碱性反应的指示剂。 ⚫ b.氧化汞和汞：HgO是效能较高的催化剂，可得氮的最佳回收率。注意：容易生成硫化 汞沉淀可使反应液引起暴沸，防止暴沸的措施是添加锌粒。而且Hgo.Hg是剧毒物质。 注意通风污染环境价格贵。 ⚫ c.硒粉：催化效能较强，可大大缩短消化 时间，但用量不宜过多，消化时间不可过久， 并小心控制温度，否则将引起氮素损失。 ⚫ (3)氧化剂：添加氧化剂是帮助有机物消化，但要防止NH3进一步氧化为N。 ⚫ a.次氯酸钾和高锰酸钾：强氧化剂会使氨氧化为氮而损失，一般不易使用，但含C高时， 可用KmnO4 。 ⚫ b.过氧化氢：消化速度高，操作简便，须冷却后加入过氧化氢
4、具体操作步骤: (1)、消化: 精密称取固体样品0.2-2g半固态2-5g液体样品10-20m于凯氏烧瓶(30-50ml)加入无水 K2SO2 g CuSO20.2H2SO420ml。凯氏烧瓶成45倾斜先小火加热待泡沫停止后加大火(330-400, 直到溶液澄清透明为止(34h)。冷却后加水定容(数次冲洗,使溶液全部注入容瓶) (2)、蒸馏: ●将2%硼酸溶液10m放入10oml三角瓶中,加入甲基红混和指示剂5滴,将冷凝管尖端浸入液面下。 将凯氏烧瓶中的内容物移入蒸馏瓶中40% Naohlom加热蒸馏,至硼酸液由酒红色变为蓝绿色时 继续蒸馏5分钟,将冷凝管尖端提出液面,冲洗尖端 ●(3)、滴定: 馏出液用00N标准HCL溶液滴定,直到蓝绿色变为灰紫色。并将滴定结果用空白试验校正。 (4)、计算: 蛋白质(%)=(V1-V2)*N*0.014*6,25∧W*100 V1品滴定时用去001mol标准HCL液 G V2空白滴定时用去00 molAl毫升 N一标准HCL溶液的当量浓度 ●0.014 ImllmolHCL相当于0.014g氮 625N的pro换算系数 W—样品克数 图10-2微量凯氏定氮蒸馏装置
⚫ 4、具体操作步骤： ⚫ （1）、消化： ⚫ 精密称取固体样品0.2—2g,半固态2—5g液体样品10—20ml 于凯氏烧瓶（30—50ml）加入无水 K2SO42g,CuSO40.2 H2SO4 20ml 。 凯氏烧瓶成45倾斜先小火加热待泡沫停止后加大火（330—400）， 直到溶液澄清透明为止（3—4h)。冷却后加水定容（数次冲洗，使溶液全部注入容瓶） ⚫ （2）、蒸馏： ⚫ 将2%硼酸溶液10ml放入100ml三角瓶中，加入甲基红混和指示剂5滴，将冷凝管尖端浸入液面下。 将凯氏烧瓶中的内容物移入蒸馏瓶中40%NaOH10ml加热蒸馏，至硼酸液由酒红色变为蓝绿色时， 继续蒸馏5分钟，将冷凝管尖端提出液面，冲洗尖端。 ⚫ （3）、滴定： ⚫ 馏出液用0.01N标准HCL溶液滴定，直到蓝绿色变为灰紫色。并将滴定结果用空白试验校正。 ⚫ （4）、计算： ⚫ 蛋白质（%）=（V1 -V2）*N*0.014*6.25/W *100 ⚫ V1—品滴定时用去0.01mol标准HCL液毫升数 ⚫ V2—空白滴定时用去0.01molHcL毫升数 ⚫ N—标准HCL溶液的当量浓度 ⚫ 0.014—1ml1molHCL相当于0.014g氮 ⚫ 6.25—N的pro换算系数 ⚫ W—样品克数