12天，确定无菌后方可使用 (八)无菌水的制 在每个250m 的三角瓶内装100mL的蒸馏水并塞上棉塞或硅胶塞。在每支试管内装 4.5mL蒸馏水，塞上棉塞或硅胶塞。再在棉塞上包上一张牛皮纸，高压蒸汽灭菌。0.1MP阳 灭菊2030min. 五、实验内容 根据要求清洗各种玻璃器皿，并进行包扎 根据要求配制各种培养 5. 用电热鼓风干燥箱对玻璃器皿进行干热灭茵。 4. 用高压蒸汽灭菌锅对所配各培养基灭菌。 六、实验报告 1 简述移液管和培养皿的包扎注意事项。 简述配制培养基的基本步骤及注意事项 3. 为什么微生物实验室所用的移液管口或滴管口的上瑞均需塞入一小段棉花，再用报纸包 起来，经高压蒸汽灭茵后才能使用 4. 为什么微生物实验室所用的三角瓶口或试管口都要塞上棉塞（硅胶塞）才能使用？ 5.配制培养基时为什么要调节H? 6. 高压蒸汽灭菌为什么比干热灭菌要求温度低、时间短？ 附录灭菌技术 一、目的婴求 了解消毒和灭茵的原理，并掌握各种灭菌方法的操作步骤。 二、实验材料 仪器或其他用具：上述包扎的培养皿、试管、移液管等，电热鼓风干燥箱，高压蒸 汽灭菌锅，微孔滤膜过滤器，0.22μm滤膜，注射器，镊子，玻璃涂棒 培养基：上述配制的培养基及生理盐水 三、基本原理 在微生物实验中，需要讲行纯培养。不能有任何杂菌污染，因此必须对所用器材、培弟 基和工作场所进行灭菌和消毒。灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物，包括微生物的营养 体、芽孢和孢子。实验室常用的灭菌方法包括直接灼烧 恒温干燥箱灭菌、高压蒸汽灭 间歇灭菌、煮沸灭菌等方法。这些方法的基本原理是通过加热使微生物体内蛋白质凝固变性， 从而达到灭菌的目的。 四、操作步骤 (一)干热灭菌法 干热灭菌是在电热干燥箱内利用高温干燥空气(160℃~170℃)进行灭菌，它是利用高 温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。此法适用于玻璃器皿如移液管、试管 和培养皿的灭菌。培养基、橡胶制品、塑料制品不能采用干热灭菌。 细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量 越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固越慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭 菌所需温度高(160℃-170℃)，时间长(1-2h)。但干热灭菌温度不能超过180℃，否则， 包器皿的纸或棉塞就会烧焦 ,甚至引起燃烧。 干热灭菌使用的是电热干燥箱（干燥箱）。 具体操作步骤如下： 1,装入待灭菌物品：将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内，关好箱门。1~2 天，确定无菌后方可使用。 （八）无菌水的制备 在每个 250mL 的三角瓶内装 100mL 的蒸馏水并塞上棉塞或硅胶塞。在每支试管内装 4.5mL 蒸馏水，塞上棉塞或硅胶塞。再在棉塞上包上一张牛皮纸，高压蒸汽灭菌。0.1MPa 灭菌 20~30min。 五、实验内容 1. 根据要求清洗各种玻璃器皿，并进行包扎。 2. 根据要求配制各种培养基。 3. 用电热鼓风干燥箱对玻璃器皿进行干热灭菌。 4. 用高压蒸汽灭菌锅对所配各培养基灭菌。 六、实验报告 1. 简述移液管和培养皿的包扎注意事项。 2. 简述配制培养基的基本步骤及注意事项。 3. 为什么微生物实验室所用的移液管口或滴管口的上端均需塞入一小段棉花，再用报纸包 起来，经高压蒸汽灭菌后才能使用? 4. 为什么微生物实验室所用的三角瓶口或试管口都要塞上棉塞（硅胶塞）才能使用？ 5. 配制培养基时为什么要调节 pH？ 6. 高压蒸汽灭菌为什么比干热灭菌要求温度低、时间短？ 附录 灭菌技术 一、目的要求 了解消毒和灭菌的原理，并掌握各种灭菌方法的操作步骤。 二、实验材料 1. 仪器或其他用具：上述包扎的培养皿、试管、移液管等，电热鼓风干燥箱，高压蒸 汽灭菌锅，微孔滤膜过滤器，0.22μm 滤膜，注射器，镊子，玻璃涂棒。 2. 培养基：上述配制的培养基及生理盐水 三、基本原理 在微生物实验中，需要进行纯培养，不能有任何杂菌污染，因此必须对所用器材、培养 基和工作场所进行灭菌和消毒。灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物，包括微生物的营养 体、芽孢和孢子。实验室常用的灭菌方法包括直接灼烧、恒温干燥箱灭菌、高压蒸汽灭菌、 间歇灭菌、煮沸灭菌等方法。这些方法的基本原理是通过加热使微生物体内蛋白质凝固变性， 从而达到灭菌的目的。 四、操作步骤 （一）干热灭菌法 干热灭菌是在电热干燥箱内利用高温干燥空气（160℃~170℃）进行灭菌，它是利用高 温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌目的。此法适用于玻璃器皿如移液管、试管 和培养皿的灭菌。培养基、橡胶制品、塑料制品不能采用干热灭菌。 细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量 越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固越慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭 菌所需温度高（160℃~170℃），时间长（1~2h）。但干热灭菌温度不能超过 180℃，否则， 包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 干热灭菌使用的是电热干燥箱（干燥箱）。 具体操作步骤如下： 1. 装入待灭菌物品：将包好的待灭菌物品放入电热干燥箱内，关好箱门