31常规DNA测序技术的 基本原理 所谓"常规测序方法"的基本特 点有两个:第一,把待测序的 DNA分子进行处理,得到每个 只差1个核苷酸的一系列逐步 缩短的DNA分子的混合物;第 二,通过凝胶电泳把这些DNA 分子分离开来,形成阶梯状排列 的条带,然后逐个读出DNA的 碱基序列。 32DNA测序方法 在此介绍四种测序方 3.2.1化学法测序 得到长度只差一个碱基的 DNA分子的方法主要有两种 种是用化学方法把待测序的 DNA片段在每个碱基处切断 次。这是由 Maxam和 Gilbert 发明的方法。具体做法是把待测 序的DNA分子成单链分子,其 5端用32p进行放射性标记。 然后把这些单链DNA分于分成 4份,每份用一种化学试剂处理 DNA片段,每种试剂可使DNA 分子在一种碱基的5端的磷酸 二酯键处发生断裂。例如,试剂 可使单链DNA分子在A碱基 处断裂,试剂二可使单链DNA 分子在T碱基处断裂,依此类 推。把反应条件控制好,使每个 DNA分子只发生一次断裂,这 样,我们就得到4种反应产物 每种由在一种碱基处发生断裂 形成的DNA片段组成。 把这4种反应产物用聚丙 烯凝胶电泳进行分离,两个3.1 常规 DNA 测序技术的 基本原理 所谓"常规测序方法"的基本特 点有两个：第一，把待测序的 DNA 分子进行处理，得到每个 只差 1 个核苷酸的一系列逐步 缩短的 DNA 分子的混合物；第 二，通过凝胶电泳把这些 DNA 分子分离开来，形成阶梯状排列 的条带，然后逐个读出 DNA 的 碱基序列。 3.2 DNA 测序方法 在此介绍四种测序方法： 3.2.1 化学法测序 得到长度只差一个碱基的 DNA 分子的方法主要有两种。 一种是用化学方法把待测序的 DNA 片段在每个碱基处切断一 次。这是由 Maxam 和 Gilbert 发明的方法。具体做法是把待测 序的 DNA 分子成单链分子，其 5'端用３２p 进行放射性标记。 然后把这些单链 DNA 分于分成 4 份，每份用一种化学试剂处理 DNA 片段，每种试剂可使 DNA 分子在一种碱基的 5'端的磷酸 二酯键处发生断裂。例如，试剂 一可使单链DNA分子在 A碱基 处断裂，试剂二可使单链 DNA 分子在 T 碱基处断裂，依此类 推。把反应条件控制好，使每个 DNA 分子只发生一次断裂，这 样，我们就得到 4 种反应产物， 每种由在一种碱基处发生断裂 形成的 DNA 片段组成。 把这 4 种反应产物用聚丙 烯凝胶电泳进行分离，两个