生化大实验是一门综合性的实验课程，教学的目的在于通过对生命物质的分离制备，纯化，分析等综合性实验，在已掌握的基础生物化学理论知识和生化实验常用方法的基本原理、基本操作技术（如滴定、比色、层析、电泳等）的基础上，训练学生的综合实践动手能力，掌握蛋白质、酶、核酸等重要物质的分离、纯化等的测定技术。实验一蛋白质含量的测定实验二离子交换法血清纯化IgG实验三离子交换层析法分离血清白蛋白实验四SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量实验五等电聚焦法测定样品的等电点实验六质粒的分离与纯化实验七PCR扩增目的基因片段实验八酶联免疫吸附实验

实验一 植物基因组DNA的提取及其定性定量分析. 1 实验二 PCR扩增目的片段和胶回收. 8 实验三 目的片段和载体的连接. 15 实验四 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化效率检测. 18 实验五 重组质粒的转化. 20 实验六 重组质粒DNA的提取及酶切鉴定. 23 实验七 RNA的提取（TRIzol法）. 30 实验八 mRNA的分离与纯化. 36 实验九 RT-PCR技术. 38 实验十 用mRNA差异显示法分离特异表达的基因片段 . 40 实验十一 cDNA文库的构建. 46 实验十二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） . 51 实验十三 Southern印迹杂交法（Southern blot）. 56 实验十四 RNA分子杂交（Northern blot）. 62 实验十五 固定化蛋白质的免疫生化鉴定（Western blot）. 67 实验十六 RFLP技术. 71 实验十七 RAPD技术. 74 实验十八 细胞分裂中期染色体的荧光原位杂交技术(FISH). 76 附录一 常用缓冲液及其配制. 80 附录二 常用抗生素溶液. 85 附录三 常用贮存液的配制. 85 附录四 常用核酸蛋白换算数据. 93 附录五 染料在凝胶中的迁移速度. 94 附录六 实验中的一些好习惯. 95

第一节 概述 第二节 核酸的组成 第三节 DNA的结构 第四节 RNA的结构 第五节 核酸及核苷酸的性质 第六节 核酸的分离提取与纯化

第一节 概述 第二节 核酸的组成 第三节 DNA的结构 第四节 RNA的结构 第五节 核酸及核苷酸的性质 第六节 核酸的分离提取与纯化

一、液体化合物的分离与提纯方法 有机合成产生的液体化合物其分离纯化一般采用蒸馏的方法。根 据待分离组分和理化性性质的不同,蒸馏可以分为简单蒸馏和精馏 (分馏);根据装置系统内的压力不同又可分为常压和减压蒸馏。对于 沸点差极小的组分分离或对产物纯度要求极高的分离,则可应用高真 空技术

目录 一、农药分析取样与分离 二、农药的分离与纯化方法 三、商品农药的一般分析方法 四、气相色谱技术 五、薄层分析、酶抑制技术和荧光技术 六、免疫学检测方法 七、超临界流体萃取技术 八、手性拆分与毛细管电泳

第一节 菌种选育 一 菌样采集 二 富集 三 菌种纯化和分离 四 新种性能的测试 五 高产菌株的选育 1 诱变育种 2 基因重组育种 第二节 酶的生产方式 第三节 培养基 第四节 灭菌 第五节 发酵过程的控制 第六节 酶的工业提取 第七节 酶的改造与模拟

前面我们所学的凝胶过滤法、离子交换法以及电泳等一系列分离纯化生物大分子的 手段，比起早期采用的盐析法，有机溶剂及等电点沉淀法等，分离效果要好得多。但是， 这些方法中，或是利用生物大分子在一定条件下不同的溶解度、电荷分布、总电荷的不 同，或是依据其分子的大小和形状的不同。一句话，多是利用生物分子间物理和化学性 质的差异来进行分离纯化的。由于这些方法的特异性比较低，加之待分离物质之间的物 化性质差异较小，常常要综合不同的分离方法。经过许多步骤才能使生物分子达到一定 的纯度

3.1 气体液化与分离 3.1.1 气体液化 3.1.2 气体分离和纯化系统 3.1.4 变压吸附 3.1.5 空气分离系统 3.1.3 气体的分离原理

❖ 生物亲和作用 ❖ 亲和色谱 ❖ 膜亲和过滤法 ❖ 亲和双水相萃取 ❖ 亲和反胶团萃取 ❖ 亲和沉淀 ❖ 磁性亲和分离