紫外吸收光谱法的应用 定性分析 ·推断分子结构 ·纯度检查 ·定量测定
紫外吸收光谱法的应用 • 定性分析 • 推断分子结构 • 纯度检查 • 定量测定
(四)定量测定 Lambert-Beer定律：A=ebc 1.普通分光光度法 2.双波长分光光度法 3.导数分光光度法（导数光谱法） 4.示差分光光度法
（四）定量测定 Lambert-Beer定律：A=ebc 1. 普通分光光度法 2. 双波长分光光度法 3. 导数分光光度法（导数光谱法） 4. 示差分光光度法
Lambert-Beer定律 光吸收基本定律 Lambert-Beer定律是说明物质对单色光吸收的强弱与吸光物 质的浓度（C)和液层厚度（1)间的关系的定律，是光吸收的基 本定律，是紫外一可见光度法定量的基础。 透光率：T T= Sample (conc.C) Io 吸光度：AA=-gT=lg Path length b Lambert-Beer定律：当一束平行的单色光通过溶液时，溶液的吸 光度(4)与溶液的浓度(c)和光程(b)的乘积成正比。 朗伯定律(1760)A=lg/)=k1b 比尔定律(1852)A=lg(L/)=k2c
Lambert-Beer 定律——光吸收基本定律 Lambert-Beer 定律是说明物质对单色光吸收的强弱与吸光物 质的浓度（C）和 液层厚度（l）间的关系的定律，是光吸收的基 本定律，是紫外—可见光度法定量的基础。 Sample (conc. C) Path length b I0 It Lambert-Beer 定律: 当一束平行的单色光通过溶液时，溶液的吸 光度 (A) 与溶液的浓度 (c) 和光程 (b) 的乘积成正比。 A = a·c·b 朗伯定律(1760) A=lg(I0 /It )=k1b 比尔定律(1852) A=lg(I0 /It )=k2c 透光率：T 0 I I T t = 吸光度：A t o I I A = −lgT = lg
摩尔吸光系数 当b以cm,c以mol/L为单位，a称为摩 尔吸光系数，用表示。 的单位为L/mocm,它表示物质的浓度 为1mo/L,液层厚度为1cm时，溶液的吸光 度。 a与的关系为：a=elM（M为摩尔质量) M-8mb/A 相对分子量的测定
当b 以cm，c 以 mol/L为单位，a称为摩 尔吸光系数，用 ε表示。 摩尔吸光系数 M=emb/A 相对分子量的测定 ε的单位为 L/mol·cm，它表示物质的浓度 为1 mol/L，液层厚度为1 cm时，溶液的吸光 度。 a与ε的关系为：a =ε/M （M为摩尔质量）
吸光度的加和性 溶液中含有多种吸光物质且各组分之间不存在相互作用， 则该溶液对光的总吸光度等于各组分的吸光度之和。 比尔定律的局限 本身的局限性：只适用于稀溶液c<0.01mol/L 化学偏离：分析物质与溶剂发生缔合、离解及 溶剂化反应，生成物与分析物质具有不同的吸收光谱。 仪器偏离：单色光不纯引起的偏离
吸光度的加和性 溶液中含有多种吸光物质且各组分之间不存在相互作用， 则该溶液对光的总吸光度等于各组分的吸光度之和。 比尔定律的局限 本身的局限性：只适用于稀溶液c<0.01 mol/L 化 学 偏 离 ： 分 析 物 质 与 溶 剂 发 生 缔 合 、 离解及 溶剂化反应，生成物与分析物质具有不同的吸收光谱。 仪器偏离：单色光不纯引起的偏离
1.普通分光光意法 1)单组分测定 标准对比法 As=EbCs 仅测一个标液c、得A、;同样条件下 A.=EbCx 测定未知试样A,得C Cx= 吸光系数法 根据手册或文献中的吸光系数， 根据朗伯一比尔定律求得 sb
1）单组分测定 标准对比法 仅测一个标液cs得As ；同样条件下 测定未知试样Ax , 得cx 吸光系数法 根据手册或文献中的吸光系数， 根据朗伯—比尔定律求得 s s A = ebc Ax bcx = e s s x x c A A c = b A cx e = 1.普通分光光度法
标准曲线法 0.8 A y=0.3617x+0.0034 R2=0.9994 0.6 0.2 0.0 0.5 1.5 选定条件下，测一系列标液得标准曲线(A一C标准 曲线），又称工作曲线。测定未知试样A,查出Cx
y = 0.3617x + 0.0034 R 2 = 0.9994 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 0 0.5 1 1.5 2 A c 标准曲线法 选定条件下，测一系列标液得标准曲线（A—C 标准 曲线），又称工作曲线。测定未知试样Ax，查出Cx。 Cx Ax
2)多组分测定 (1)若各组分的吸收曲线互不重 组分a 组分b 叠，则可在各自最大吸收波长 处分别进行测定。这本质上与 单组分测定没有区别。 入2 (2)若各组分的吸收曲线互有重 叠，则可根据吸光度的加合性 求解联立方程组得出各组分的 含量。 A%=4号+A9=6号bC,+bc, 入2 A,=4,+4晚，=bc。+bc
2）多组分测定 ⑵ 若各组分的吸收曲线互有重 叠，则可根据吸光度的加合性 求解联立方程组得出各组分的 含量。 ⑴ 若各组分的吸收曲线互不重 叠，则可在各自最大吸收波长 处分别进行测定。这本质上与 单组分测定没有区别。 a b A A A 1 1 1 = + b b a a bc bc 1 1 = e + e a b A A A 2 2 2 = + b b a a bc bc 2 2 = e + e
(3)吸收光谱单向重叠 •在入1处a、b组分都吸收 •在入2处b组分吸收，a组分不干扰 A=A号+A=&号bc,+&号bc, A=4晚=6号，bc, 入2
a b 1 2 (3) 吸收光谱单向重叠 •在1处a、b组分都吸收 •在2处b组分吸收，a组分不干扰 a b A A A 1 1 1 = + b b a a bc bc 1 1 = e + e b A A 2 2 = b b bc 2 = e
1.0x10-3mo/L的A物质溶液在420nm和545nm处的吸光度分 别为0.200和0.050,1.0×104mo/L的B物质溶液在420nm处 无吸收，在545nm处的吸光度为0.420，今测得含两种物质的 混合溶液在420nm和545nm处的吸光度分别为0.380和0.710， 试计算该混合物中A和B的浓度。假设采用10mm吸收池进行 测定。 解： A,=4号+49=© A,=A号+A晚 420nm 545nm A=bc 1.0×103A 0.200 0.050 A 1.0x104B 0 0.420 A(ca)+B(Cp) 0.380 0.710 bc
1.010-3 mol/L的A物质溶液在420 nm和545 nm处的吸光度分 别为0.200和0.050， 1.010-4 mol/L的B物质溶液在420 nm 处 无吸收，在545 nm处的吸光度为0.420，今测得含两种物质的 混合溶液在420 nm和545 nm处的吸光度分别为0.380和0.710， 试计算该混合物中A和B的浓度。假设采用10 mm吸收池进行 测定。 a b A A A 1 1 1 = + b b a a bc bc 1 1 = e + e a b A A A 2 2 2 = + b b a a bc bc 2 2 = e + e 解： 420 nm 545 nm 1.010-3 A 0.200 0.050 1.010-4 B 0 0.420 A(ca )+B(cb ) 0.380 0.710 A = ebc bc A e =