安徽医科大学 1 第七章体外放射分析技术
安徽医科大学 第七章 体外放射分析技术
安徽医科大学 标记分析技术是一组超微量体外分析技术的总称。它 是利用某种特异性结合剂与被测物质和标记物进行结合反 应，从而对超微量物质进行定量的分析技术。如标记物为 放射性核素则称为体外放射分析。 放射免疫分析(RIA) 免疫放射分析(RMA) 体外放射分析 受体放射分析RBA) 放射受体分析(RRA)
安徽医科大学 标记分析技术是一组超微量体外分析技术的总称。它 是利用某种特异性结合剂与被测物质和标记物进行结合反 应，从而对超微量物质进行定量的分析技术。如标记物为 放射性核素则称为体外放射分析。 体外放射分析 放射免疫分析(RIA) 免疫放射分析(IRMA) 受体放射分析(RBA) 放射受体分析(RRA)
安徽医科大学 1是 放射免疫分析RIA) y原理 放射性标记抗原与非标记抗原（包括标准抗原或待测抗 原)与有限量的特异性抗体发生可逆性竞争结合。 Ag+Ab AgAb+Ag Ag* Ag*+Ag*Ab
安徽医科大学 一、放射免疫分析(RIA) 原理 放射性标记抗原与非标记抗原(包括标准抗原或待测抗 原)与有限量的特异性抗体发生可逆性竞争结合。 Ag + Ab Ag Ab + Ag + Ag* Ag*+Ag*Ab
安徽医科大学 yRIA的基本步骤 1.加样 2.孵育 3.分离结合和游离部分 4.测放射性 5.数据处理
安徽医科大学 RIA的基本步骤 1. 加样 2. 孵育 3. 分离结合和游离部分 4. 测放射性 5. 数据处理
安激医科大学 y基本试剂 CAL (一)特异性结合剂 特异性结合剂包括抗体、血浆结合球蛋白和受体 1.抗体 抗体的制备是用适宜的纯化的免疫原在动物身上 人工免疫，分子量>5000的蛋白多肽类物质具有较好 的免疫原性。 抗血清质量鉴定的检测指标是滴度、亲和力和特 异性。 抗体应具备三个条件：高亲和力、高特异性和高 滴度
安徽医科大学 (一)特异性结合剂 基本试剂 特异性结合剂包括抗体、血浆结合球蛋白和受体 1. 抗体 抗体的制备是用适宜的纯化的免疫原在动物身上 人工免疫，分子量>5000的蛋白多肽类物质具有较好 的免疫原性。 抗血清质量鉴定的检测指标是滴度、亲和力和特 异性。 抗体应具备三个条件：高亲和力、高特异性和高 滴度
安激医科大学 2.标记抗原 高比活度和高放化纯度是保证分析灵敏度的前提； 半衰期不能太短，以保证整个分析过程的完成； 不改变原有抗原的特性。 y复合物和游离抗原的分离 抗原抗体在液相环境中反应： 1)双抗法 2)聚乙二醇法
安徽医科大学 2. 标记抗原 高比活度和高放化纯度是保证分析灵敏度的前提； 半衰期不能太短，以保证整个分析过程的完成； 不改变原有抗原的特性。 复合物和游离抗原的分离 抗原抗体在液相环境中反应： 1) 双抗法 2) 聚乙二醇法
安徽医科大学 3)葡萄球菌蛋白沉淀法 4)活性炭吸附法 5)微孔滤膜法 抗体吸附于固体支持物上： 1)吸附牢固而且抗体量足够： 2)不影响抗体的免疫活性； 3)非特异性结合低； 4)吸附材料理化性质稳定； 5)吸附材料价廉易得
安徽医科大学 3) 葡萄球菌蛋白沉淀法 4) 活性炭吸附法 5) 微孔滤膜法 抗体吸附于固体支持物上： 1) 吸附牢固而且抗体量足够； 2) 不影响抗体的免疫活性； 3) 非特异性结合低； 4) 吸附材料理化性质稳定； 5) 吸附材料价廉易得
安激医科大学 方法包括： L.试管固相法： 2.微粒固相法； 3.微球固相法。 yRLA系统的分析性能及实验设计 分析性能是指一个分析系统总的性能，而不是指个别测 定结果的可信度，因此通常都需有较多的测定结果，并 用统计学的方法作出判断。 精密度 灵敏度 准确度
安徽医科大学 方法包括： 1.试管固相法； 2.微粒固相法； 3.微球固相法。 RIA系统的分析性能及实验设计 分析性能是指一个分析系统总的性能，而不是指个别测 定结果的可信度，因此通常都需有较多的测定结果，并 用统计学的方法作出判断。 精密度 灵敏度 准确度
安激医科大学 CAL C 精密度是指同一样品重复测定的实测量的离散程度。离 散程度越小，则能区别的样品量差别越小，也就是分析系统 的精密度越高。 灵敏度就是统计上能与零剂量相区别的最小值。 准确度是指样品的测定值偏离真值的程度，由于实际样 品的真值是未知的，常用估计准确度的方法是测量实际样品 外加标准品的回收率。理论上回收率一般以90%-110%之间。 回收率=回收管测得值-对照管测得值 回收管内加入的已知量 元元元元元
安徽医科大学 精密度是指同一样品重复测定的实测量的离散程度。离 散程度越小，则能区别的样品量差别越小，也就是分析系统 的精密度越高。 灵敏度就是统计上能与零剂量相区别的最小值。 准确度是指样品的测定值偏离真值的程度，由于实际样 品的真值是未知的，常用估计准确度的方法是测量实际样品 外加标准品的回收率。理论上回收率一般以90%-110%之间。 回收管内加入的已知量 回收管测得值 对照管测得值 回收率 - =
安激医科大学 RIA的实验设计 1.尽可能提高灵敏度先选定尽可能少又能满足控制测 量误差要求的标记抗原用量，然后选合适的抗体浓度， 要求标准曲线起始段的斜率最高。 2.提高精密度图的使用范围应当在上述第一种方案的 基础上，适当增加抗体用量，使标准曲线下降不要太快， 并在随后的区段有较好的斜率。 y放射免疫分析的数据处理 数据处理的基本步骤
安徽医科大学 RIA的实验设计 1. 尽可能提高灵敏度 先选定尽可能少又能满足控制测 量误差要求的标记抗原用量，然后选合适的抗体浓度， 要求标准曲线起始段的斜率最高。 2. 提高精密度图的使用范围 应当在上述第一种方案的 基础上，适当增加抗体用量，使标准曲线下降不要太快， 并在随后的区段有较好的斜率。 放射免疫分析的数据处理 数据处理的基本步骤