●●。第八章免疫学实验技术 免疫学实验技术 是指利用免疫反应特异性的原理,建立的各种检测与分析以 及建立这些技术的各种制备方法。 包括: (1)免疫血清学技术如沉淀试验等; (2)细胞免疫学技术如免疫细胞功能鉴定等; (3)免疫学制备技术如高免血清制备等
第八章 免疫学实验技术 免疫学实验技术 是指利用免疫反应特异性的原理,建立的各种检测与分析以 及建立这些技术的各种制备方法。 包括： （1）免疫血清学技术 如沉淀试验等； （2）细胞免疫学技术 如免疫细胞功能鉴定等； （3）免疫学制备技术 如高免血清制备等
第一节免疫血清学技术 抗原与相应抗体在体内和体外均能发生特异性结合,因抗 体主要来自血清,因此在体外进行的抗原抗体反应称为血清学 反应或免疫血清学技术 、免疫血清学技术的类型 (1)凝聚性反应:凝集试验和沉淀试验 (2)标记抗体技术:荧光抗体技术、酶标抗体技术、放射 性同位素标记抗体技术、发光标记抗体技术等 (3)有补体参与的反应:如补体结合反应 (4)中和反应:如病毒中和试验、毒素中和试验 (5)免疫复合物散射技术:如激光散射免疫技术 (6)电免疫反应:如免疫传感器技术 (7)免疫转印技术:如 Western Blotting
第一节 免疫血清学技术 一、免疫血清学技术的类型 （1）凝聚性反应：凝集试验和沉淀试验 （2）标记抗体技术：荧光抗体技术、酶标抗体技术、放射 性同位素标记抗体技术、发光标记抗体技术等 （3）有补体参与的反应：如补体结合反应 （4）中和反应：如病毒中和试验、毒素中和试验 （5）免疫复合物散射技术：如激光散射免疫技术 （6）电免疫反应：如免疫传感器技术 （7）免疫转印技术：如Western Blotting 抗原与相应抗体在体内和体外均能发生特异性结合，因抗 体主要来自血清，因此在体外进行的抗原抗体反应称为血清学 反应或免疫血清学技术
免疫血清学反应的一般特点 1.特异性与交叉性 具有高度特异性 The ability of an individual antibody combining site to react with only one antigenic determinant The ability of a population of antibody molecules to react with only one antigen 若存在共同抗原,则发生交叉反应。 The ability of an individual ab combining site to react with more than one antigenic determinant The ability of a population of ab molecules to react with more than one Ag
1. 特异性与交叉性 具有高度特异性 • The ability of an individual antibody combining site to react with only one antigenic determinant. • The ability of a population of antibody molecules to react with only one antigen. 若存在共同抗原，则发生交叉反应。 • The ability of an individual Ab combining site to react with more than one antigenic determinant. • The ability of a population of Ab molecules to react with more than one Ag 二、免疫血清学反应的一般特点
2.抗原抗体结合机理 High affinity Low Affinity (1)可逆性,分子表面结合 ab Ab 2)比例适当 (3)存在二阶段性,即结合 阶段和可见阶段 Ag Ag A g excess Ab excess attice formatⅰon 3.免疫血清学反应的影响因素 (1)电解质(2)温度(3)酸碱度(4)振荡(5)杂质
2. 抗原抗体结合机理 (1) 可逆性，分子表面结合 (2) 比例适当 (3) 存在二阶段性，即结合 阶段和可见阶段 Ab Ag High Affinity Ab Ag Low Affinity Ag excess Equivalence – Lattice formation Ab excess 3. 免疫血清学反应的影响因素 (1) 电解质 (2) 温度 (3) 酸碱度 (4) 振荡 (5) 杂质
凝聚性试验 抗原与相应抗体结合形成竞疫复合物,在电解质存在下, 免疫复合物相互凝聚形成肉眼可见的凝小块或沉淀物,以 判定是否存在相应的抗体或抗原,称为凝聚性试验。 根据参与反应的抗原性质不同,可分为两大类: (1)凝集试验 agglutination test) 主要是颗粒性抗原参与 (2)沉淀试验( precipitation test 主要是可溶性抗原参与
三、凝聚性试验 抗原与相应抗体结合形成免疫复合物，在电解质存在下， 免疫复合物相互凝聚形成肉眼可见的凝集小块或沉淀物，以此 判定是否存在相应的抗体或抗原，称为凝聚性试验。 根据参与反应的抗原性质不同，可分为两大类： （1）凝集试验(agglutination test) 主要是颗粒性抗原参与 （2）沉淀试验(precipitation test) 主要是可溶性抗原参与
(一)凝集反应 当颗粒性抗原与其相疝抗血清混合时,在一定浓度的电解 质环境中,抗原凝集成大小不瞢的凝棊块,叫凝反应。 凝集反应广泛地应用于疾病的诊斷和各种抗原性质的分析。 即可用已知免疫血清来检查未知抗原。亦可用已知抗原检测特 异性抗体。 凝集试验的种类 (1)直接凝集试验:颗粒性抗原 (2)间接凝集试验:可溶性抗原 (3)病毒的血凝与血凝抑制试验 (4)乳胶凝集试验
（一）凝集反应 当颗粒性抗原与其相应抗血清混合时，在一定浓度的电解 质环境中，抗原凝集成大小不等的凝集块，叫凝集反应。 凝集反应广泛地应用于疾病的诊断和各种抗原性质的分析。 即可用已知免疫血清来检查未知抗原，亦可用已知抗原检测特 异性抗体。 凝集试验的种类 （1）直接凝集试验： 颗粒性抗原 （2）间接凝集试验： 可溶性抗原 （3）病毒的血凝与血凝抑制试验 （4）乳胶凝集试验
1、直接凝梟试验 颙粒抗原与抗体直接结合出觊凝梟觊京叫直接凝集反疝。 (1)玻片凝集反应 取清洁玻片一张,用接种环分别取诊断血清、诊断血清和生理 盐水于玻片三个位置上。 2.无菌用接种环取待检细菌培养物少许,分别混合于其中第一点 诊断血清和生理盐水上。 3.同法取对照细菌培养物少许,于第二点诊断血清混勻。 4.轻轻摇动玻片,经12分钟后肉眼观察,出现乳白色凝集块.即 为阳性反应;仍为均匀的乳浊液,即为阴性反应
1、直接凝集试验 颗粒抗原与抗体直接结合出现凝集现象叫直接凝集反应。 （1）玻片凝集反应 1．取清洁玻片一张，用接种环分别取诊断血清、诊断血清和生理 盐水于玻片三个位置上。 2．无菌用接种环取待检细菌培养物少许，分别混合于其中第一点 诊断血清和生理盐水上。 3．同法取对照细菌培养物少许，于第二点诊断血清混匀。 4．轻轻摇动玻片，经1-2分钟后肉眼观察，出现乳白色凝集块，即 为阳性反应；仍为均匀的乳浊液，即为阴性反应
(2)试管凝集反应 为一种定量试验,用已知抗原检查血清中有无特异抗体 并测定其相对含量。 取7只洁净小试管于管架,分别加0.5mL生理盐水, 2.在第1管中加1:10稀释血清0.5mL,混合后吸出05mL 毫升于第2管,同样混匀后吸出0.5mL于第3管。依次类推,稀 释到第6管,吸0.5mL弃去。第7管不加血清作为对照; 3.用移液管吸取待检抗原,分别加每管0.5mL; 4.同法于第2排各管中加入伤寒O菌液0.5mL。 5.将各管振荡混匀,放37℃水浴箱中2-4小时或37℃ 孵育箱中过夜次日取出观察结果
（2）试管凝集反应 为一种定量试验，用已知抗原检查血清中有无特异抗体， 并测定其相对含量。 1．取7只洁净小试管于管架，分别加0.5mL生理盐水。 2．在第1管中加1:10稀释血清0.5mL，混合后吸出0.5mL 毫升于第2管，同样混匀后吸出0.5mL于第3管。依次类推，稀 释到第6管，吸0.5mL弃去。第7管不加血清作为对照； 3．用移液管吸取待检抗原，分别加每管0.5mL； 4．同法于第2排各管中加入伤寒O菌液0.5mL。 5．将各管振荡混匀，放37℃水浴箱中2—4小时或37℃ 孵育箱中过夜次日取出观察结果
2、间接凝集反应 将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的颗粒载体上,然后 与相应的抗体结合,也可出现颗粒载体的凝集现象,称为间接 凝集反应。间接凝集反应比直接凝集反应敏感性为高,可用于 微量抗体或抗原的检查。 间接血凝谜验的分类: (1)正向间接凝集试验 (2)反向间接凝集试验 (3)间接凝集抑制试验
2、间接凝集反应 将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的颗粒载体上，然后 与相应的抗体结合，也可出现颗粒载体的凝集现象，称为间接 凝集反应。间接凝集反应比直接凝集反应敏感性为高，可用于 微量抗体或抗原的检查。 间接血凝试验的分类： （1）正向间接凝集试验 （2）反向间接凝集试验 （3）间接凝集抑制试验
(1)间接血球凝集试验(间接血凝试验) 间接血泶凝梟试验是根据红血球表面的吸附作用而建立 起来的。将细菌可溶性抗原提出使之吸附于红血球表面,此 时红血礅即称为“致敏红血球”。这种致敏的红血嗷具有细 菌的抗原性,与相应的抗血清相遇可产生凝集现录 间接血凝抗原的制鲁可用加碱或加热的方法使菌体中的 多糖物质漫出。去除类脂以免干扰红血球的吸附作用。但如 系蛋白质时则用来吸附的红血泶卿先用鞣酸予以处理
（1）间接血球凝集试验(间接血凝试验) 间接血球凝集试验是根据红血球表面的吸附作用而建立 起来的。将细菌可溶性抗原提出使之吸附于红血球表面，此 时红血球即称为“致敏红血球” 。这种致敏的红血球具有细 菌的抗原性，与相应的抗血清相遇可产生凝集现象。 间接血凝抗原的制备可用加碱或加热的方法使菌体中的 多糖物质浸出，去除类脂以免干扰红血球的吸附作用。但如 系蛋白质时则用来吸附的红血球需先用鞣酸予以处理