第三讲: 高效液相色谱法及应用 2004年3月14日
第三讲： 高效液相色谱法及应用 2004年3月14日
色谱分离 △中等 O快 Temporal course
慢 中等 快 色谱分离 Temporal course 淋洗液
由于液体与气体性质的以下差异 溶质在液体中的扩散系数比它在气 体中小105倍左右 液体粘度比气体约大10倍 液体表明张力比气体大104倍左右 液体密度比气体约大103倍 液体不可压缩
由于液体与气体性质的以下差异： •溶质在液体中的扩散系数比它在气 体中小105倍左右 •液体粘度比气体约大102倍 •液体表明张力比气体大104倍左右 •液体密度比气体约大103倍 •液体不可压缩
液相色谱以液体为流动相,固定相可以 是固体或液体(担载在固体表面),与 气相色谱比,带来一系列变化 例如,填充柱气相色谱柱,一般填料的 尺寸为80-100目,粒度大约是2毫米, 而一般高效液相色谱的固定相粒度在2 10微米,因此流动相通过这样一段固 定床时就产生了很高的反压
液相色谱以液体为流动相，固定相可以 是固体或液体（担载在固体表面），与 气相色谱比，带来一系列变化： 例如，填充柱气相色谱柱，一般填料的 尺寸为80-100目，粒度大约是2毫米， 而一般高效液相色谱的固定相粒度在2 －10微米，因此流动相通过这样一段固 定床时就产生了很高的反压
因此,我们通常所说的高效液相色谱 High Performance Liquid Chromatography) 实际也是高压液相色谱( High Pressure Liquid Chromatography)因为没有很高的压 力就不可能产生很高的分离效率。 键合相高效液相色谱算是—种色谱模式, 因为用的是键合相的固定相
因此，我们通常所说的高效液相色谱 （High Performance Liquid Chromatography) 实际也是高压液相色谱(High Pressure Liquid Chromatography),因为没有很高的压 力就不可能产生很高的分离效率。 键合相高效液相色谱算是一种色谱模式， 因为用的是键合相的固定相
液相色谱的分类 1.按溶质在分离过程中的原理 吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 体积排阻色谱 亲和色谱
一、液相色谱的分类 1. 按溶质在分离过程中的原理： • 吸附色谱 • 分配色谱 • 离子交换色谱 • 体积排阻色谱 • 亲和色谱
2按色谱固定相的飛式 平板色谱(平面色谱) 柱色谱 3按分离的压力 高压液相色谱(高效液相色谱) 中压液相色谱 常压液相色谱
2.按色谱固定相的形式： • 平板色谱（平面色谱） • 柱色谱 3.按分离的压力 • 高压液相色谱（高效液相色谱） • 中压液相色谱 • 常压液相色谱
H-dp关系图 E三 10 0 三 10 10 200 填料粒度(μm) HPLC柱填料粒径(d)与柱效 和柱压降的关系
H－dp关系图
二、液固色谱法 一般也把吸附色谱法称为液固色谱法。 液固色谱法的固定相一般为固体吸附剂 常用的是:碳酸钙、硅胶、氧化铝、氧 化镁、活性炭等。其中硅胶最为常用。 吸附色谱对中等分子量的油溶性样品可 获得最佳的分离,而对强极性或离子型 的样品,有时会发生不可逆吸附,不能 得到满意的结果
二、液固色谱法 一般也把吸附色谱法称为液固色谱法。 液固色谱法的固定相一般为固体吸附剂， 常用的是：碳酸钙、硅胶、氧化铝、氧 化镁、活性炭等。其中硅胶最为常用。 吸附色谱对中等分子量的油溶性样品可 获得最佳的分离，而对强极性或离子型 的样品，有时会发生不可逆吸附，不能 得到满意的结果
基本原理: 吸附剂一般为多孔性的物质,在它们的表明存 在着分散的吸附中心,溶质分子和流动相分子 在吸附剂表面的活性中心上进行竞争,同时不 同溶质之间和同一溶质的不同官能团之间液也 存在竞争。竞争的综合结果就是形成不同溶质 在吸附剂表面吸附、解吸平衡
基本原理： 吸附剂一般为多孔性的物质，在它们的表明存 在着分散的吸附中心，溶质分子和流动相分子 在吸附剂表面的活性中心上进行竞争，同时不 同溶质之间和同一溶质的不同官能团之间液也 存在竞争。竞争的综合结果就是形成不同溶质 在吸附剂表面吸附、解吸平衡