核酸抽取及杂交
核酸抽取及杂交
第一部分DNA提取总论
第一部分 DNA提取 总论
一、提取DNA总的原则1保证核酸一级结构的完整性：2其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度；3核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子；4其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除
一、提取DNA总的原则： 1 保证核酸一级结构的完整性； 2 其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类 分子 的污染应降低到最低程度； 3 核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶 剂和过高浓度的金属离子； 4 其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除
二、样本来源：理论上所有有核真核细胞、细菌、病毒都可以提取DNA样本选择取决于试验目的全血是基因组提取最常见的样本
二、样本来源： ◼ 理论上所有有核真核细胞、细菌、病毒都 可以提取DNA ◼ 样本选择取决于试验目的 ◼ 全血是基因组提取最常见的样本
血清、血浆、外周血有核细胞、痰液、体液、棉拭子采集的各种分泌物、组织（包括骨髓）和羊水等都是分子诊断的检验材料，其中全血、血浆（血清）标本占分子诊断的60%以上
◼ 血清、血浆、外周血有核细胞、痰液、体 液、棉拭子采集的各种分泌物、组织（包 括骨髓）和羊水等都是分子诊断的检验材 料，其中全血、血浆（血清）标本占分子 诊断的60%以上
DNA提取前样本采集、预处理和保存抗凝剂处理血（一）全血肝素柠檬酸*EDTA*1.抗凝剂-80℃保存2个月，第10天收率90%EDTA-Na2第四天收率90%或枸橡酸钠℃4作为抗凝剂第10天提取效第十天收率85%果差不宜使用肝素提取效果差第四天收率90%室温第十天提取效果差
DNA提取前样本采集、预处理和保存： （一）全血 1.抗凝剂 EDTA-Na2 或枸橼酸钠 作为抗凝剂 不宜使用肝素 抗凝剂处理血 肝素 柠檬酸* EDTA* -80℃ 保存2个月，第10天收率90% 4 ℃ 第四天收率90% 第10天提取效 果差 第十天收率85% 室温 提取效果差 第四天收率90% 第十天提取效果差
cBDA←560bp-560bp-560bpmRNA逆转录后RT-PCR结果（0、3、6个月）
mRNA逆转录后RT-PCR结果（0、3、6个月） A B C D
血浆和血清（二）1血浆和血清是检测释放入血的游离核酸最主要的标本来源，用来检测病毒、细菌，以及肿瘤细胞等等释放出来的游离核酸和蛋白质产物，在临床上被广泛应用于病原微生物和肿瘤标志基因的检测中
（二）血浆和血清 ◼ 血浆和血清是检测释放入血的游离核酸最主要的 标本来源，用来检测病毒、细菌，以及肿瘤细胞 等等释放出来的游离核酸和蛋白质产物，在临床 上被广泛应用于病原微生物和肿瘤标志基因的检 测中
血浆DNA又称为循环DNA，是一种无细胞状态的胞外DNA，主要是游离的单链、双链DNA或DNA-蛋白质的混合物它在未来分子诊断的应用中具有广阔前景血浆DNA成分的来源分为内源性和外源性两个部分，其中入侵的病毒、细菌等病原体释放入血液的核酸是外源性血浆DNA最重要的成分
◼ 血浆DNA又称为循环DNA，是一种无细胞状态的 胞外DNA，主要是游离的单链、双链DNA或DNA- 蛋白质的混合物 ◼ 它在未来分子诊断的应用中具有广阔前景 ◼ 血浆DNA成分的来源分为内源性和外源性两个部 分，其中入侵的病毒、细菌等病原体释放入血液 的核酸是外源性血浆DNA最重要的成分
血浆DNA内源性循环DNA外源性循环DNA入侵的病毒、细菌等病原体自身基因组来源DNA死亡细胞活细胞释放
血浆DNA 内源性循环DNA 外源性循环DNA 自身基因组来源DNA 入侵的病毒、细菌等病原体 死亡细胞 活细胞释放