实验细菌的生理生化
实验 细菌的生理生化
糖发酵实验 目的要求 1.了解糖发酵的原理和在肠道细 菌鉴定中的重要作用。 2.掌握通过糖发酵鉴别不同微生 物的方法
糖发酵实验
、 基本原理 糖发酵试验是最常用的生化反应，在肠道细 菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用 糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖的能 力上有很大的差异，有些细菌能分解某种糖并 产酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢、 甲烷、二氧化碳等)；有些细菌只产酸不产气。 例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气； 伤寒杆菌能分解葡萄糖产酸不产气，不能分解 乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不 能分解乳糖。 图
二、基本原理 酸的产生可利用指示剂来断定。在配制培 养基时预先加入溴甲酚紫[Ph5.2（黄色)- 6.8（紫色)]，当发酵产酸时，可使培养基 由紫色变为黄色。 气体的产生可由发酵管中倒置的德汉氏小 管中有无气泡来证明。 寇 超
糖发酵实验 00 糖发酵培养基杜氏小管 培养 黄色或红色 产气 或 不产气 图1糖类发酵试验
④ 郎秘皮 十一产粮①一产酸产气
菌种 糖类发酵 大肠杆菌 产气肠杆菌 普通变形杆菌 空白对照 葡萄糖发酵 蔗糖发酵 乳糖发酵
菌种 糖类发酵 大肠杆菌 产气肠杆菌 普通变形杆菌 空白对照 葡萄糖发酵 蔗糖发酵 乳糖发酵
靛基质（哚）试验 ■有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的 色氨酸生成吲哚（靛基质）。哚本身没有颜 色，不能直接看见，但当加入对二甲基氨基 苯甲醛试剂时，该试剂与吲哚作用，形成红 色的玫瑰吲哚
◆ (1)接种培养 取装有蛋白胨水培养液的微量发酵管1支，以无菌操 作分别接种细菌，置37℃恒温箱中培养48h。 ● (2)观察记录 在培养液中加入乙瞇1~2滴，经充分振荡使吲哚萃取 至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此 时沿管壁缓慢加入1滴吲哚试剂（加入吲哚试剂后切 勿摇动试管，以防破坏乙醚层影响结果观察)，如有 吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，此为吲哚试验阳性 反应，否则为阴性反应，阳性用“十”、阴性用“一” 表示
乙酰甲基甲醇试验(V.P.试验) ■某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解 葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合、脱羧成乙 酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中 氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的胍基 生成红色化合物，称V.P.(+)反应